乌干达非HIV住院患者中活动性肺结核的C反应蛋白检测：诊断准确性研究

蒋君

在乌干达坎帕拉的一家国家转诊医院进行的这项前瞻性横断面研究的目的，是确定血清C反应蛋白（CRP）作为HIV阴性住院患者进行结核病（TB）分型试验的诊断性能。研究人员计算敏感性、特异性、阳性和阴性似然比以及阳性和阴性预测值，以确定CRP酶联免疫吸附试验（ELISA）（Eurolyser）与两份痰标本结核分枝杆菌培养参考标准的诊断性能。研究人员根据WHO的分流测试目标产品概况，构建了接收器工作曲线，并参考制造商的截止值，以及为达到>90%灵敏度而选择的阈值来报告性能。在119例HIV血清阴性的住院患者中，46例（39%）为培养阳性肺结核。在结核分枝杆菌培养中，当制造商的阈值为10毫克/升时，CRP的敏感性为78%（95%CI，64-89%），特异性为52%（95%CI，40-64%）。在1.5毫克/升的阈值下，敏感性为91%（95%CI，79-98%），但特异性只有21%（95%CI，12-32%）。当按任一阈值的疾病严重程度进行分层时，表现没有差异。总之，在HIV血清阴性的住院患者中，CRP测试的结果远远低于结核病分类测试的目标。需要在诊所和社区环境中对HIV血清阴性人群进行进一步的研究，以评估CRP在结核病筛查中的效用。

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发布时间: 2020-12-21

用薄层琼脂对埃斯瓦蒂尼地区进行直接表型药敏试验，可快速检测出结核分枝杆菌的生长和利福平耐药性，否则会被世卫组织认可的诊断试验遗漏

蒋君

Xpert®MTB/RIF能快速检测出对利福平（RR）的耐药性，但该检测漏掉了导致rpoB突变的I491F-RR，这种突变在南部非洲很常见。此外，Xpert®MTB/RIF不能区分活结核分枝杆菌和死结核分枝杆菌。 研究人员探讨薄层琼脂（TLA）直接药敏试验（DST）检测埃斯瓦蒂尼地区结核分枝杆菌（MTB）及其耐药性能力。连续样本与Xpert®MTB/RIF和TLA并行检测利福平（1.0μg/ml）和氧氟沙星（2.0μg/ml）。在安特卫普的参考实验室，将TLA结果与Löwenstein-Jensen或7H11固体培养基上的间接DST以及其他表型和基因型检测进行比较，以解决不一致性。 TLA对MTB检测阳性率为7.1%，而对Xpert®MTB/RIF的阳性率为10.0%。在研究的4547个样本中，有200个菌株可用于与复合参考品进行比较。在中位数18.4天之内，TLA检测RR的敏感性为93.0%（CI-77.4-98.0），特异性为99.4%（CI 96.7-99.9），而Xpert®MTB/RIF的敏感性为62.5%（CI 42.7-78.8），特异性为99.3%（CI 96.2-99.9）。其中8株（占所有RR确诊分离株的28.6％）携带I491F突变，均由TLA检测到。TLA还正确鉴定了184株氧氟沙星S分离株中的183株（99.5%特异性，CI 97.0-99.9）。 综上所述，在野外条件下，TLA可快速检测RR，在这种特殊情况下，有助于检测Xpert®MTB/RIF以外的其他RR患者，这主要但不唯一地归因于I491F。TLA还可准确排除氟喹诺酮类药物的耐药性。

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发布时间: 2021-03-29

T-Cell Xtend对T-SPOT.TB检测在血液标本延迟处理后的影响

蒋君

T-SPOT®.TB（T-SPOT）是一种γ-干扰素释放测定法（IGRA），根据斑点形成T细胞的数量用于检测结核分枝杆菌的感染；然而，研究表明，样品处理的延迟减少了实验室处理后检测到的这些斑点的数量。据报道，在血液样本处理前加入T-Cell Xtend（XT）可以延长血液采集和处理的时间，最长可达32小时。在这项研究中， 306名来自潜伏性结核病（TB）感染（LTBI）或进展为结核病高危人群（青少年和成人）的血液样本被分为三组：1）早期处理（采集后4.5小时）有无XT；2）延迟处理（采集后24小时）有无XT；3）不使用XT的早期处理和使用XT的延迟处理。参与者的配对样本在当地实验室进行处理，并评估定性和定量结果的一致性。XT的加入并不能一总是增加或减少斑点的数量。在第1组、第2组和第3组中，经XT处理的样品13%（10/77）、28.0%（30/107）和24.6%（30/122）有更多的斑点，而与未经XT处理的样品相比， 33.8%（26/77）、26.2%（28/107）和38.5%（47/122）的样品斑点数较少。研究结果表明，XT不能可靠地减轻加工延迟样品中斑点形成T细胞的损失。

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发布时间: 2021-03-08

耐多药肺结核患者中德拉马尼的群体药代动力学分析

蒋君

利用来自四个德拉马尼临床试验的数据，建立了耐多药肺结核病（MDR-TB）患者的德拉马尼群体药代动力学（PopPK）模型。最终的PopPK数据集包含744名接受优化背景方案（OBR）治疗的耐多药结核病患者的20483份血浆样本。对于所有观察到的给药方案和亚群，德拉马尼药代动力学通过一级消除和吸收的二室模型进行了充分描述，吸收滞后时间和相对生物利用度随着剂量的增加而降低。200mg和更高剂量（250和300 mg）的相对生物利用度分别为100mg剂量的76%和58%。晚上给药后的相对生物利用度比早晨高26%，门诊患者比住院患者高9%。早晨给药比晚上给药后吸收率更高，滞后时间更短。东北亚和东南亚地区患者的相对生物利用度分别比非亚洲地区患者高53%和40%。低蛋白血症（白蛋白水平<3.4 g/dl）患者的表观清除率更高（达−0.892）。在HIV患者中联合使用依法韦仑可使德拉马尼清除率提高35%。年龄（18至64岁）、轻度或中度肾损害、抗结核抗生素耐药状态、HIV状况或肝功能不全标志物，或同时服用OBR、拉米夫定、替诺福韦、吡哆醇、CYP3A4抑制剂和诱导剂或抗酸剂，不影响德拉马尼暴露。模型评估表明模型的拟合度和预测能力强，表明该模型是可靠的，可用于后续的PK/PD分析。

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发布时间: 2020-12-29

在高发病率地区，使用T-SPOT.TB诊断非常规胸膜结核优于ADA：601例前瞻性分析

蒋君

结核性胸腔积液（TPE）是最常见的肺外表现，可能对肺功能有持久的影响。然而，传统的TPE诊断试验存在多方面的局限性。鉴于此，研究人员评估了干扰素γ释放试验（IGRA：T-SPOT.TB）对不同特征的TPE患者的诊断效力。 研究人员进行了一项前瞻性的单中心研究，包括2015年6月至2018年10月连续登记的所有疑似胸腔积液患者。通过受试者特性（ROC）曲线，确定并分析了技术临界值和T-SPOT有胸腔积液（PF）上的用途。采用Logistic回归分析获得TPE的独立危险因素，并与ADA比较，按危险因素分层的T-SPOT试验的效果。 本次研究共连续招募601人。早期分泌性抗原靶点-6（ESAT-6）和培养滤液蛋白-10（CFP-10）的最大斑点形成细胞（SFCs）在本研究中具有最佳的诊断效率，与ADA（0.885 vs 0.887，P = 0.957）相当，优于外周血（PB），敏感性为83.0%，特异性为83.1%（截止值为466个SFCs / 10 6个单核细胞）。在ADA（<40 IU/L）低的TPE患者中，PFT-SPOT的敏感性和特异性分别为87.9%和90.5%。ADA的有效性与年龄呈负相关，但PFT-SPOT测试在各年龄段均表现稳定。年龄（< 45 岁；比值比（OR）= 5.61，95%可信区间（CI）3.59–8.78；P < 0.001）、性别（男性；OR = 2.68，95%可信区间1.75–2.88；P < 0.001）和体重指数（BMI）（< 22；OR = 1.93，95%可信区间1.30–2.88；P = 0.001）通过多因素logistic回归分析显示，它们与结核病风险独立相关。值得注意的是，按危险因素分层时，PFT-SPOT的敏感性优于ADA的敏感性（76.5%比23.5%，P =0.016），且效特异性也不差（84.4%比96.9%，P =0.370）。 综上所述，PFT-SPOT分析可以有效鉴别ADA低于40 IU/L的TPE患者，在非常规TPE患者（年龄≥45岁，女性或BMI≥22）中优于ADA。PFT-SPOT分析是补充ADA诊断TPE的理想选择。

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发布时间: 2021-01-18

坦桑尼亚耐多药结核病患者中不同治疗方案的分子细菌载量测定对分枝杆菌的杀菌效果

蒋君

利福平或耐多药结核病（RR/MDR-TB）的治疗已基本过渡到不含注射用氨基糖苷类成分的治疗方案，尽管该类药物在治疗早期具有杀菌活性。研究人员测试了结核分子细菌负荷试验（TB-MBLA）测定的结核分枝杆菌在sputa中的杀伤率是否与RR/MDR-TB方案的组成相关。在第0、3、7和14天收集RR/MDR-和药物敏感结核患者的连续痰，然后每月进行4个月的抗结核治疗。用TB-MBLA定量测定痰中结核分枝杆菌16srRNA的活菌数，估算每毫升菌落形成单位（eCFU/ml）。采用重复测量的非线性混合效应模型比较不同方案的结核分枝杆菌杀灭率。37例患者共产生296个连续痰液，治疗方法如下：13例患者接受无贝达奎林注射液对照方案，9例患者接受含贝达奎林注射液方案，8例患者接受全口服贝达奎林方案，用利福平/异烟肼/吡嗪酰胺/乙胺丁醇（RHZE）治疗7例药物敏感性肺结核。与注射用无贝达喹啉对照方案调整后的结核分枝杆菌杀灭率−0.17（95% CI为−0.23至−0.12）相比，注射用含贝达喹啉方案的杀灭率为−0.62（95% CI为−1.05至−0.20）log10 eCFU/ml（P = 0.019），-0.35（95% CI为-0.65至-0.13）log10 eCFU/ml（全口服贝达喹啉方案）（P = 0.054），和-0.29（95% CI为-0.78至+0.22）log10 eCFU/ml（RHZE方案）（P = 0.332）。因此，在接受贝达喹啉治疗的患者中，sputa对结核分枝杆菌的杀灭率更高，但通过添加注射用氨基糖苷类药物，结核分枝杆菌的杀灭率进一步提高。

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发布时间: 2021-03-25

优化耐多药结核病的超短治疗方案（TB-TRUST）：一项随机对照试验的研究方案

蒋君

耐多药结核病（MDR-TB）治疗效果不理想，迫切需要更有效、更具创新性的治疗方案。新的耐多药结核病有效治疗方案取得了很高的治疗成功率。但是，那些没有药物敏感性试验（DST）的方案也可能导致耐药性的出现。在DST指导下进行精确治疗可以优化患者的治疗效果，并最大程度地减少耐药扩增。 TB-TRUST是一项针对非劣效性的III期、多中心、开放标签、随机对照临床试验，比较世界卫生组织（WHO）较短方案和改良超短方案对氟喹诺酮类药物和二线注射药物敏感的利福平耐药结核病的治疗成功率。对照组根据痰涂片时间的不同，在36-44周内采用含WHO注射剂的较短治疗方案。研究组通过全基因组测序（WGS）采用分子DST指导的优化超短方案，对吡嗪酰胺敏感的患者使用左氧氟沙星、利奈唑胺、环丝氨酸和吡嗪酰胺进行24-32周的治疗，并使用左氧氟沙星、利奈唑胺、吡嗪酰胺和氯法齐明对吡嗪酰胺耐药进行36-44周治疗。主要结果是治疗开始后84周无复发的治疗成功率。次要结果包括痰培养转化时间和不良事件的发生。假设α = 0.025显著性水平（单侧检验），功效为80%，对照组和研究组之间的治疗成功率相差 < 10%（80%对82%），以及5%的随访失败率上升时，计算出每臂非劣效性参与者人数为177人（总共354人）。 快速分子检测可区分哪些患者适合接受较短的氟喹诺酮治疗，并且WGS指导的结果可将吡嗪酰胺敏感患者的治疗缩短至6个月。可以预见，无论是新开发的药物，还是经DST证实具有敏感性的传统强效药物，都是保证抗多药结核病药物疗效的关键因素。作为DST指导下的精确治疗，TB-TRUST有望使更多负担不起昂贵新药的患者获得最佳治疗效果，并通过合理使用抗结核药物最大程度减少甚至避免耐药扩增。

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发布时间: 2021-03-01

小剂量丁胺卡那霉素治疗耐多药结核病

蒋君

世界卫生组织建议静脉注射丁胺卡那霉素（又称阿米卡星）治疗耐多药结核病，剂量为15毫克/千克。然而，高剂量与明显的毒性有关。 在研究机构治疗的耐多药结核病患者接受丁胺卡那霉素治疗，剂量为8–10毫克/千克，并根据治疗药物监测进行剂量调整。研究人员对2010年至2016年间接受丁胺卡那霉素治疗的耐多药结核病患者进行了一项回顾性队列研究。 49名患者被纳入研究。丁胺卡那霉素的中位起始剂量为8.9毫克/千克（IQR 8，10），目标治疗药物水平在中位治疗期12天达到（IQR 5，26）。丁胺卡那霉素治疗的中位持续时间为7.2个月（IQR 5.7,8），痰培养转化的中位时间为1个月（IQR 1,2）。根据正式的听力测试，6名患者（12.2%）出现听力下降（95%可信区间4.6–24.8%）；22.2%的患者出现主观听力损失（95%可信区间11.2–37.1%）和31.9%的主观耳鸣（95%可信区间19.1–47.1%）。10名患者（23%）血清肌酐显著升高（95%CI 11.8–38.6%），但只有5名患者在治疗结束时GFR<60。84%的患者有治疗成功（95%可信区间84–99%）。 综上所述，小剂量丁胺卡那霉素与氨基糖苷类药物不良事件发生率相对较低有关。研究人员假设在a组和B组药物无法建立适当的治疗方案的情况下，小剂量丁胺卡那霉素可以作为一种安全有效的治疗耐多药结核病的方法，以及在对不良事件进行仔细监测是可行的。

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发布时间: 2021-03-19

结核分枝杆菌对低水平利福平耐药性和rpoB突变：纽约地区全基因组测序和药敏试验数据分析

蒋君

快速、可靠地检测利福平（RIF）耐药性对耐药性和耐多药性（MDR）结核病的诊断和治疗至关重要。不一致的RIF表型/基因型易感性结果仍然是一个挑战，因为rpoB突变的存在并不能带来高水平的RIF耐药性，如Ser450Leu等突变株所显示的那样。与完全敏感菌株相比，这些菌株被称为低水平RIF耐药菌株，表现出较高的RIF MICs，但通过分枝杆菌生长指示管（MGIT）检测仍表现出表型敏感性，并与患者预后不良相关。研究人员通过全基因组测序（WGS）在一组1779株前瞻性试验菌株中评估RIF耐药性预测，包括rpoB基因突变的流行率和表型，作为2.5年内常规临床试验的一部分。在此期间，发现139株菌株具有非同义rpoB突变，其中53株与RIF耐药相关，包括低水平和高水平耐药。43株（81.1%）菌株对RIF（MGIT为1.0μg/ml）产生了耐药性。其余10株（18.9%）对MGIT敏感，但通过MIC检测证实为低水平RIF耐药性。完整的rpoB基因测序克服了临界浓度分型、探针分型和部分基因测序方法的局限性。通用的临床WGS与同时的表型测试提供了对rpoB患病率和类型更完整的了解 突变及其与纽约RIF耐药性的关系。同时进行表型检测的通用临床WGS提供了对纽约rpoB突变的流行率和类型及其与RIF耐药性的关联的更全面的了解。

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发布时间: 2021-04-12

磷脂酰肌醇甘露糖苷酰基转移酶PatA是结核分枝杆菌体内和体外生长所必不可少的

蒋君

结核分枝杆菌由一种不寻常的细胞膜组成，它由独特的脂类和聚糖控制，对亲水性药物具有渗透性屏障，是其生存和毒性的关键。磷脂酰肌醇甘露糖苷（PIMs）是一种糖脂，不仅是细胞膜的关键结构成分，而且是脂甘露聚糖（LM）和脂阿拉伯甘露聚糖（LAM）的前体糖脂，是与宿主-病原体相互作用有关的重要脂聚糖。研究人员重点研究PatA，一种膜相关酰基转移酶，它将棕榈酰基部分从棕榈酰辅酶A转移到甘露糖环的6位，该位置与PIM1/PIM2中肌醇的2位相连。研究人员验证了PatA在体内和体外对结核分枝杆菌的作用，构建了一个patA条件突变株，并证明patA在批培养中具有杀菌作用。这种表型与分枝杆菌内膜的重要结构成分Ac1PIM2水平显著降低有关。在巨噬细胞感染和小鼠感染模型中也证实了PatA对生存能力的要求，其中在PatA基因沉默后观察到存活细胞数显著减少。这让人想起PimA的行为，它是启动PIM途径的甘露糖基转移酶，也被发现是结核分枝杆菌在体内和体外生长所必需的。总之，实验数据强调了PIM生物合成途径的早期步骤对结核分枝杆菌生理学的重要性，并揭示了PatA是针对这一主要人类病原体的药物发现计划的新靶点。 结核病（TB）是单一传染源导致死亡的主要原因。结核分枝杆菌菌株中耐药性的出现，强调需要确定新的靶点和抗菌药物。分枝杆菌的细胞膜是导致这种耐药性的主要因素。研究人员重点研究了PIMs的生物合成、关键毒力因子和细胞膜的重要组成部分。具体来说，研究人员已经确定PatA，在结核分枝杆菌中是必需的。这些结果强调了PIM生物合成途径早期步骤对分枝杆菌生理学的重要性以及PatA作为潜在新药靶点的适用性。

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发布时间: 2021-04-08