《基于双向解旋酶作用的真核细胞DNA双向复制》

  • 来源专题:转基因生物新品种培育专项服务
  • 编译者: Zhao
  • 发布时间:2017-07-31
  • 从真核生物DNA的双向复制起始点开始的双向复制过程,需要该位点方向相反的两个环状微小染色体维持蛋白构成的解旋酶(MCM)的作用。目前研究可知,DNA复制起始子(ORC)与DNA双链的结合,使得MCM开始装配,但是DNA复制起始子(ORC)如何与MCM蛋白结合的作用机理尚不清楚。因此,我们利用天然芽殖酵母的DNA复制起点与相应的DNA合成序列片段来解释MCM的装配过程,即通过两个DNA复制起始子(ORC)通过在ORC结合位点的结合作用。研究发现,这些位点的相对取向(非位点之间的距离),对体外MCM装配和体内DNA复制起始作用是至关重要的。基于此,我们提出一种假设:通过DNA复制起始子(ORC)对单个MCM六聚体的对称装配,将MCM蛋白转移并与两个六聚体相结合,并以此作为在古细菌和真核生物中建立双向复制的统一作用机制。

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    • 2024年6月11日,斯坦福大学医学院的研究人员在Cell 上发表了题为Single-molecule imaging reveals the mechanism of bidirectional replication initiation in metazoa的文章。 后生动物基因组从数千个复制起点双向复制。复制起始需要在每个起点组装和激活两个CMG解旋酶 (Cdc45 Mcm2-7 gins)。这需要几个复制触发因子 (包括TopBP1,RecQL4和DONSON),其确切作用仍在争论中。两个解旋酶如何在每个原点正确组装和激活是一个长期存在的问题。 通过实时可视化GINS,Cdc45,topp1,RecQL4和DONSON的募集,研究人员发现复制启动是令人惊讶的动态。首先,TopBP1瞬时结合到起点并在DNA合成开始之前解离。其次,两个Cdc45被一起募集,即使单独的Cdc45不能二聚化。接下来,两个拷贝的DONSON和两个GINS同时到达原点,完成了两个CMG解旋酶的组装。最后,RecQL4被招募到CMG DONSON CMG复合物中,并通过其ATPase活性促进DONSON解离和CMG激活。
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    • 来源专题:新发突发疾病(新型冠状病毒肺炎)
    • 编译者:张玢
    • 发布时间:2019-03-10
    • 寨卡病毒(ZIKV)和痘病毒感染被认为是突发公共卫生事件,需要开发有效的疫苗。在这里,报告新的基于重组DNA和非复制痘苗病毒(NTV)的疫苗候选物,其表达ZIKV的前体膜包膜(prME)或包膜(E)糖蛋白。使用同源方案(DNA / DNA,NTV / NTV)或异种(DNA / NTV)方案用疫苗免疫BABL / c小鼠后,检测老鼠们到相似水平的抗E IgG和中和抗体(微量中和试验)。然而,当使用基于DNA或基于NTV的疫苗的异质初免 - 加强方案(DNA / NTV)时,在小鼠中引发显着更高水平的E特异性T细胞应答。此外,在接受初免 - 加强方案(DNA / NTV)的小鼠中检测到中和抗体和针对痘苗病毒(VV)的T细胞免疫应答,而经受同源NTV / NTV方案的小鼠具有更高的水平。抗VV IgG和中和抗体。最后,在ZIKV E蛋白中鉴定出新的H-2d限制性CD8 T细胞表位VRSYCYEASISDMAS。这些数据证明了针对ZIKV和正痘病毒的二价候选疫苗的概念证据,并且支持使用DNA-prME prime和NTV-E加强方案来预防ZIKV和正痘病毒感染。