《Science:重大进展!嵌合纳米颗粒可针对一系列冠状病毒产生交叉免疫反应,有望开发出通用冠状病毒疫苗》

  • 来源专题:生物安全知识资源中心 | 领域情报网
  • 编译者: hujm
  • 发布时间:2021-01-18
  • 引起大流行的SARS-CoV-2病毒只是冠状病毒家族中许多不同病毒中的一种。这种病毒家族中的许多成员在蝙蝠等动物种群中传播,并有可能像SARS-CoV-2一样,“跳到” 人类群体中。美国加州理工学院生物学与生物工程教授Pamela Björkman及其团队正在致力于开发针对一系列相关冠状病毒的疫苗,目的是预防未来的大流行病。

    如今,在Björkman实验室的研究生Alex Cohen的带领下,这个团队设计了一种基于蛋白的60亚单位纳米颗粒,该纳米颗粒上面附着了多达8种不同类型的冠状病毒的片段。当注射到小鼠体内时,这种疫苗会诱导产生对各种不同的冠状病毒---包括没有呈现在这种纳米颗粒上的类似病毒---作出反应的抗体。相关研究结果于2021年1月12日在线发表在Science期刊上,论文标题为“Mosaic nanoparticles elicit cross-reactive immune responses to zoonotic coronaviruses in mice”。

    这种称为嵌合纳米颗粒(mosaic nanoparticle)的疫苗平台,最初是由英国牛津大学的合作者开发的。这种纳米颗粒的形状就像是由60个相同蛋白组成的笼子,每蛋白上都有一个小的功能类似于尼龙搭扣(Velcro)的蛋白标签。Cohen 和他的团队获取不同冠状病毒的刺突蛋白(刺突蛋白在感染中起着最大的作用)的片段,并给每个片段添加可与纳米颗粒笼子上的蛋白标签结合在一起的蛋白标签。当这些病毒片段与纳米颗粒笼子结构混合在一起时,每个病毒片段上的标签都会附着在笼子上的蛋白标签上,从而使得纳米颗粒表面上呈现出代表不同冠状病毒毒株的刺突蛋白片段。

    用这种纳米颗粒平台呈现8种不同的冠状病毒刺突蛋白片段,即受体结合结构域(RBD),可让小鼠产生多样化的抗体反应,这比传统的疫苗方法只呈现单一类型冠状病毒的刺突蛋白片段更有优势。疫苗接种后,小鼠随后产生的抗体能够对许多不同的冠状病毒毒株产生反应。重要的是,这些抗体对这种纳米颗粒上不存在的相关冠状病毒毒株具有反应性。这表明,通过向免疫系统呈现多种不同的冠状病毒变种,免疫系统学会识别冠状病毒的共同特征,从而有可能对新出现的有潜力引起另一场大流行病的冠状病毒---不仅仅是SARS-CoV-2变种---做出反应。

    尽管该团队仍在研究这一现象背后的机制,但是这些研究结果是有希望的。下一步是研究免疫接种是否能阻止制造这些抗体的动物出现病毒感染和/或感染症状。

    Cohen说,“如果我们能够证实我们的纳米颗粒技术诱导的免疫反应确实能够保护动物免受感染导致的疾病,那么我们希望能够将这项技术推进到人类临床试验中,尽管从现在到那时还有很多步骤需要进行。我们并不设想这种方法会取代任何现有的疫苗,但在面对未来新出现的病毒威胁时,手头有很多工具是好事。”

    Björkman说,“不幸的是,SARS-CoV-2不太可能成为最后一种引起大流行病的冠状病毒。Cohen的研究结果表明有可能提高多样化的中和抗体反应,即便是针对这种注射型纳米颗粒上没有呈现的冠状病毒毒株,也是如此。因此,我们希望这项技术可以用于防范未来动物冠状病毒交叉进入人类。此外,这种纳米颗粒还能引起针对SARS-CoV-2的中和反应,因此如今有可能用它们来预防COVID-19以及其他具有大流行潜力的冠状病毒。”

  • 原文来源:https://dx.doi.org/10.1126/science.abf6840;https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2020.11.17.387092v3;https://news.bioon.com/article/6783088.html
相关报告
  • 《Cell:高福等研究团队开发出一种针对β冠状病毒的通用疫苗设计策略》

    • 来源专题:中国科学院病毒学领域知识资源中心
    • 编译者:malili
    • 发布时间:2020-07-09
    • 冠状病毒(CoV)是一组多样化的包膜病毒,可进一步细分为四个属:α-CoV、β-CoV、γ-CoV和δ-CoV。迄今为止,已知有7种CoV可导致人类疾病。其中,两种α-CoV(hCoV-NL63和hCoV-229E)和两种β-CoV(HCoV-OC43和HKU1)仅引起自限性的感冒类疾病。然而,其余三种β-CoV(SARS-CoV、MERS-CoV和SARS-CoV-2)则会危及生命。到目前为止,还没有临床上有效的预防或治疗人类高致病性CoV感染的药物,这凸显了疫苗开发的迫切性。 在CoV中,嵌入包膜中的刺突蛋白(S)负责识别宿主细胞受体,以启动病毒进入细胞。S蛋白的受体结合结构域(RBD)是这种受体停靠的必要条件。SARS-CoV和SARS-CoV-2使用相同的功能性宿主细胞受体---人血管紧张素转化酶2(hACE2),而MERS-CoV使用人CD26(也称为人二肽肽酶4,hDPP4)。科学家们之前已揭示了这些CoV识别宿主细胞受体的结构基础。 到目前为止,大多数强效中和单克隆抗体都靶向CoV RBD。因此,RBD是一个有吸引力的疫苗靶点,这是因为它可以将免疫反应集中在受体结合的干扰上。迄今为止,已有报道称,一些基于RBD的疫苗正在研制中,用于对抗MERS-CoV和SARS-CoV。然而,基于RBD的亚单位疫苗可能面临一些重要的挑战,主要来自于它们相对较低的免疫原性,因此它们必须与适当的佐剂组合使用,或者在合适的蛋白序列、片段长度和免疫方案方面对它们进行优化。增强基于RBD的疫苗免疫原性的策略包括增加抗原大小、多聚化或在颗粒中密集显示抗原,然而,这些策略不可避免地引入了外源序列,从而使得它们的临床使用潜力复杂化。 在一项新的研究中,来自中国科学院北京生命科学研究院、中国医学科学院医学实验动物研究所、中国科学院微生物研究所和中国疾病预防控制中心等研究机构的研究人员描述了一种通用的β-CoV免疫原设计,它克服了基于RBD疫苗的免疫原性限制。人们之前已经观察到CoV RBD二聚体,但它们的免疫原性尚未得到测试。他们发现,与传统的RBD单体形式相比,通过二硫键连接的RBD二聚体形式显著增强了抗体反应和中和抗体滴度。在小鼠模型中,它使得这些动物免受MERS-CoV感染,并缓解了肺部损伤。晶体结构显示这种RBD二聚体完全暴露了双受体结合基序(receptor binding motif, RBM),这是中和抗体识别的主要位点。 图片来自Cell, 2020, doi:10.1016/j.cell.2020.06.035。 相关研究结果于2020年6月28日在线发表在Cell期刊上,论文标题为“A universal design of betacoronavirus vaccines against COVID-19, MERS and SARS”。论文通讯作者为中国科学院北京生命科学研究院的戴连攀(Lianpan Dai)、中国医学科学院医学实验动物研究所所长秦川(Chuan Qin)教授、中国科学院微生物研究所研究员严景华(Jinghua Yan)以及中国疾病预防控制中心主任、中国科学院微生物研究所的高福(George F. Gao)院士。 为了提高这种二聚体的稳定性,在不引入任何外源序列的情况下,通过结构引导设计,将这种免疫原进一步设计为串联重复单链二聚体(tandem repeat single chain dimer,串联重复sc-dimer)版本。RBD-sc-二聚体作为二硫键连接的二聚体保留了较高的疫苗效力。接着,这一策略被进一步推广到开发针对另外两种高致病性β-CoV---SARS-CoV-2和SARS-CoV---的疫苗。值得注意的是,与常规的RBD单体相比,RBD-sc-二聚体设计显著提高了免疫原性,中和抗体滴度提高了10~100倍,这表明它作为β-CoV疫苗设计通用策略的可行性。 特别是,两剂量的RBD-sc-二聚体引发的针对SARS-CoV-2感染的中和抗体滴度高达大约4096。对MERS-CoV和SARS-CoV-2的RBD-sc-二聚体进行了进一步开发,以便在GMP级生产中进行中试规模生产。这两者都可以在工业标准的CHO细胞系统中以高产量(g/L水平)进行生产,这表明这种策略具有可扩展性和进一步临床开发的前景,以便控制MERS-CoV和正在进行的COVID-19大流行。 一般而言,目前的候选CoV疫苗可分为两类:(i)基于基因的疫苗,包括DNA/mRNA疫苗、重组疫苗载体和活病毒疫苗,它们在宿主细胞中产生抗原;(ii) 基于蛋白的疫苗,包括灭活全病毒和蛋白亚单位疫苗,它们的抗原在体外制造。蛋白亚单位疫苗在传统上用于疫苗开发,这类疫苗在预防乙型肝炎和带状疱疹等疾病方面具有良好的安全性和有效性。在这项新的研究中,这些研究人员报道了CoV RBD-sc-二聚体作为蛋白亚单位疫苗的设计,代表了CoV疫苗开发的一条有前途的途径。 结构指导下的抗原设计是快速、精确制造疫苗的重要工具。全长S蛋白是作为CoV抗原亚单位疫苗的另一种常见的选择。全长三聚体S蛋白通常具有很高的免疫原性,原因很可能是它具有较大的尺寸(大约600kDa)。它不仅包含RBD,即强效中和抗体的主要靶点,还包含也能诱导中和抗体或保护性抗体的非RBD区域,比如N端结构域。人们之前已报道了一种通过基于结构的抗原设计来让MERS-CoV S蛋白融合前构象保持稳定从而提高基于全长S蛋白的CoV疫苗疗效的通用策略。然而,由于已报道针对CoV免疫反应的抗体依赖性增强(ADE)现象,人们寻求最小化的有效免疫原。另外,CoV S蛋白的RBD已被认为是一个有吸引力的疫苗靶点,这是因为它在免疫聚焦(immune focusing)方面具有优势,但可能需要有效的佐剂和多剂量来产生足够的免疫原性。 这些研究人员将这种二硫键连接的RBD二聚体鉴定为免疫原:与常规的RBD单体相比,它的免疫原性显著提高,这一点通过中和抗体滴度来证实。通过结构引导设计,这种RBD二聚体经过进一步改造后成为串联重复sc-二聚体,这可以成为β-CoV疫苗设计的一种通用策略。事实上,利用RBD-sc-二聚体对小鼠进行两次免疫足以使所有针对MERS、COVID-19和SARS的测试疫苗获得高水平的抗体反应。据此,将采用两剂疫苗接种方案来评估基于RBD-sc-二聚体的CoV疫苗在动物模型和人体中的保护效果。值得注意的是,在三次免疫后, RBD单体的免疫原性与两次接种sc-二聚体疫苗相似。特别是对于SARS-CoV疫苗,RBD-sc-二聚体在三次免疫后仅表现出略高的抗体反应(** P<0.01)和中和抗体滴度(* P<0.05)。 RBD-sc-二聚体免疫原性增强的原因是:(i)抗原分子量从约30kDa翻倍到约60kDa;(ii)双RBM,即这种二聚体双价地发挥作用,这可能使B细胞中的B细胞受体交联,以获得更好的刺激;(iii)RBD的二聚体界面上的非RBM表位可能被阻塞,以进一步提高免疫聚焦;(iv) 优势免疫表位的暴露。 总之,这些研究人员提供了一种通用的策略来设计β-CoV疫苗,并在针对MERS、COVID-19和SARS的疫苗开发中证实了这个概念。由此产生的免疫原可应用于其他表达系统,如酵母、昆虫细胞,也可应用于其他疫苗平台,如DNA、信使RNA和疫苗载体。经过改造的RBD-sc-二聚体不引入任何外源序列,从而突显了这种基于RBD-sc-二聚体的CoV疫苗临床开发的可行性。这项研究中描述的COVID-19和MERS候选疫苗有希望从实验台进一步进展到临床。g/L水平的抗原产量突出了扩大生产能力,以便满足全球的迫切需求,特别是针对大流行性COVID-19的需求。 这项研究存在的局限性 众所周知,CoV RBD是中和抗体干扰病毒受体结合的主要靶点,这些研究人员关注的是基于RBD的疫苗所诱导的体液反应。还应进行扩展研究,比如被动转移实验,以进一步证实这种体液反应是否足以抵御CoV的挑战,尽管他们近期的研究工作通过使用人源单克隆抗体证实了被动保护的存在。另外,虽然在重组蛋白型疫苗的研究中,磷酸盐缓冲液(PBS)和PBS加佐剂都被广泛用作安慰剂,但使用给予无关蛋白加佐剂的对照组将是一种更好的阴性对照选择。(生物谷 Bioon.com)
  • 《病毒学家开发具有广泛保护性的冠状病毒疫苗》

    • 来源专题:纳米科技
    • 编译者:郭文姣
    • 发布时间:2021-04-17
    • 纳米医学于2021年4月16日发布COVID-19的内容。文章指出关于一种可预防COVID-19病毒和其他冠状病毒的候选疫苗已在早期动物试验中显示出有希望的结果。 候选冠状病毒疫苗是由弗吉尼亚理工大学杰出教授X.J.孟和弗吉尼亚大学健康学院教授Steven L. Zeichner共同研制的,它可以防止猪感染猪冠状病毒,即猪流行性腹泻病毒(PEDV)。 研究人员最近在《美国国家科学院院刊》上发表了他们的发现。 弗吉尼亚-马里兰兽医学院生物医学科学和病理生物学杰出教授孟表示:“候选疫苗是使用一种针对冠状病毒高度保守基因组区域的创新疫苗平台开发的。”“新的疫苗平台利用一种基因组减少细菌在其表面表达冠状病毒疫苗抗原。这样的疫苗平台可以在世界各地的现有设施中以较低的成本生产,可以满足大流行的需求。” 他们的冠状病毒疫苗提供了一些优势,可以克服全球疫苗接种工作的主要障碍。这种疫苗很容易储存和运输,即使是在世界上的偏远地区,也可以利用现有的疫苗制造工厂大量生产。 蔡克纳说:“我们的新平台提供了以非常低的成本快速生产疫苗的新途径,这些疫苗可以在世界各地的现有设施中生产,这对应对大流行病特别有帮助。” 一种新的疫苗开发方法 新的疫苗生产平台包括合成指导病毒片段生产的DNA,这些DNA可以指导免疫系统如何对病毒产生保护性免疫反应。 这个DNA被插入到另一个叫做质粒的DNA小圈中,质粒可以在细菌中繁殖。然后,质粒被引入细菌,指示细菌在其表面放置蛋白质碎片。这项技术使用的是常见的大肠杆菌。 一个主要的创新是大肠杆菌的大量基因被删除了。去除细菌的许多基因,包括组成其部分外表面或外膜的基因,似乎能显著提高免疫系统识别并对放置在细菌表面的疫苗抗原作出反应的能力。为了生产疫苗,表达疫苗抗原的细菌只需在发酵罐中培养,就像酿造等常见微生物工业过程中使用的发酵罐一样,然后用低浓度的福尔马林杀死。 灭活的全细胞疫苗目前广泛用于预防霍乱和百日咳等致命疾病。世界上许多低收入到中等收入国家的工厂现在每年生产数亿剂这种疫苗,每剂1美元或更少。他说:“也许有可能让这些工厂生产这种新疫苗。由于技术非常相似,成本也应该相似。” 整个过程,从确定一个潜在的疫苗目标到产生表面有疫苗抗原的基因缺失细菌,可以在两到三周内非常迅速地进行,使该平台成为应对大流行的理想平台。 针对COVID-19 该团队的候选疫苗采取了一种不同寻常的方法,它针对病毒的刺突蛋白的一部分,即“病毒融合肽”,这在冠状病毒中非常普遍。在SARS-CoV-2(导致COVID-19的病毒)的许多基因序列中,没有观察到融合肽有任何不同,这些基因序列在大流行期间从世界各地数千名患者身上获得。 “随着各种SARS-CoV-2变种的出现,针对所有冠状病毒保守区域(如融合肽)的疫苗可能会导致广泛保护性候选疫苗。这种疫苗如果成功,将对不同病毒株具有重大价值,”孟说。他同时也是弗吉尼亚理工大学弗拉林生命科学研究所(Fralin Life Sciences Institute at Virginia Tech)新出现的人畜传染病和节肢动物传播病原体中心(Center for Emerging, Zoonotic, and arthroarthroblood Pathogens)的创始主任。 创建他们的疫苗,研究人员使用新疫苗平台,合成DNA的指令,使融合肽和工程细菌蛋白质表面的细菌,有大量的基因移除,然后成长,冠状病毒疫苗灭活细菌的候选人。 孟和蔡克纳研制了两种疫苗,一种用于预防COVID-19,另一种用于预防猪冠状病毒,即PEDV。PEDV和SARS-CoV-2(导致COVID-19的病毒)都是冠状病毒,但它们是远亲。与所有冠状病毒一样,PEDV和SARS-CoV-2有许多共同组成融合肽的核心氨基酸。PEDV会感染猪,引起腹泻、呕吐和高烧,已经成为世界各地养猪户的巨大负担。2013年,当PEDV首次出现在美国的猪群中,仅在美国就杀死了数百万头猪。 在猪身上研究PEDV的一个优点是,研究人员可以研究疫苗在其原生宿主(在这种情况下是猪)中对冠状病毒感染提供保护的能力。用于测试COVID-19疫苗的其他模型在非本地宿主(如猴子或仓鼠)或经过基因工程使其感染SARS-CoV-2的小鼠中进行了研究。猪在生理和免疫方面也与人类非常相似——它们可能是除了灵长类动物之外与人类最接近的动物模型。 孟和Zeichner在一些意想不到的结果中发现,PEDV候选疫苗和SARS-CoV-2候选疫苗都能保护猪免受PEDV引起的疾病。这些疫苗没有防止感染,但它们保护猪不出现严重症状,这与用候选COVID-19疫苗对灵长类动物进行测试时的观察结果非常相似。疫苗还使猪的免疫系统对感染产生更强烈的免疫反应。如果PEDV和COVID-19疫苗都能保护猪免受PEDV引起的疾病,并启动免疫系统对抗疾病,那么COVID-19疫苗也可以保护人们免受严重的COVID-19疾病。 下一个步骤 额外的测试,包括人体试验COVID-19疫苗之前,需要通过联邦食品和药物管理局或其他世界各地的监管机构用于人,但合作者满意的早期的成功疫苗研发平台。 孟说:“虽然动物研究的初步结果很有希望,但还需要更多的工作来完善使用不同基因组减少菌株的疫苗平台和融合肽疫苗靶标。”“在猴子模型中测试融合肽疫苗对抗SARS-CoV-2感染也很重要。” 蔡克纳补充说,弗吉尼亚大学和弗吉尼亚理工大学这两所有着著名体育竞争对手的学校之间的合作产生了如此有希望的结果,这让他深受鼓舞。 他说:“如果弗吉尼亚大学和弗吉尼亚理工大学的科学家能够共同努力,尝试做一些积极的事情来应对这种流行病,那么也许整个国家都有希望进行合作。”