背景：
乳酸菌（LAB）是多种革兰氏阳性菌，广泛分布在各种自然栖息地中。这些可用于多种工业食品发酵中，并具有与食品工业最相关的众多特征。基因工程已经成为改善和增强商业上重要的细菌菌株潜力的有效手段。然而，在工业规模实施这种技术的过程中，重组系统的生物安全性是重要的考虑因素。为了克服这个问题，优选地从编码具有已知功能的基因的充分表征和注释的LAB质粒开发了克隆和表达系统。
结果：
所开发的穿梭载体pPBT-GFP包含两个theta型复制子，分别在乳酸乳球菌MTCC 5101和短乳杆菌MTCC 1750中分别具有4.4和2.8的拷贝数。由嗜酸乳酸杆菌MTCC 5101产生的抗菌“ pediocin”和维多利亚水母的绿色荧光蛋白（GFP）成功表达为选择标记。发酵乳杆菌NCDO 394的异源胆汁盐水解酶（BSH）已在宿主菌株中高效表达，在乳酸乳酸杆菌MTCC 5101中表现出高比活度，为126.12±10.62，而在短乳杆菌MTCC 1750中为95.43±4.26。与牛磺酸缀合的盐相比，优选与胆汁缀合的胆汁盐。
结论：
本文详细介绍了LAB / LAB穿梭表达载体pPBT-GFP的开发，该载体能够在LAB宿主，嗜酸乳酸杆菌MTCC 5101和短乳杆菌LMTCC 1750中复制。Pediocin和GFP已被用作具有高效标记的选择性标记生产异源细胞外胆汁盐水解酶。因此，所构建的载体pPBT-GFP具有在多个宿主中复制的能力，低拷贝数和在宿主细胞中的稳定性，可以用作使用遗传工程改良具有商业价值的LAB菌株的理想工具。
