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《用于对多重耐药结核病进行快速分子诊断的片上实验室平台》

  • 来源专题：结核病防治
  • 编译者： 李阳
  • 发布时间：2016-05-04

  • 来自意大利米兰IRCCS圣拉斐尔科学研究所、西班牙巴塞罗那大学、德国Borstel研究中心等机构的研究人员合作评估了基于片上实验室的VerePLEX生物系统对多重耐药结核病进行分子检测的适用性，其相关成果于2015年8月5日发表在Journal of Clinical Microbiology上。

    研究以结核杆菌临床分离株以及涂阳标本为分析样本，发现与普通的测序技术以及MTBDRplus检测技术相比，VerePLEX对结核杆菌复合群利福平和异烟肼耐药进行检测的诊断准确率要高于97.8%，且检测速度快、用户界面友好以及通用性的特点使其适用于常规实验室。

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    • Weill Cornell医学院的研究者们发现，一种正被发展中国家广泛使用且每日只需2分钱的非专利性抗感染药物在实验中能够杀死复制期和静止期（非复制期）耐药性结核杆菌，而当前只有很少几种抗结核药能做到这一点，并且对它们耐药的结核正在蔓延。 PNAS已在线报道该研究成果，该发现给世界上约50万例已经对“标准抗结核治疗”耐药的肺结核患者带来了潜在新疗法。但研究者担心oxyphenbutazone（羟基保泰松）可能不会被用于结核的临床试验。 在实验了上千种已被证实对结核杆菌有效的药物之后，Weill Cornell的Carl Nathan医生及其团队终于发现了羟基保泰松能杀死耐药性结核杆菌，他们称其“完全是个意外”。这种已经上市的药物将被重复利用，很快就会有关于它的新用途（抗结核）的实验。Dr. Nathan说：“如果能用羟基保泰松在TB病人体内做实验，也许它真的能拯救生命。在20世纪50年代早期，羟基保泰松在市面上作为一种专利药品被用于类风湿性疼痛的治疗，但到70年代，它失去了专利权，也失去了以往的市场统治地位。当前，想在美国开展该药的临床实验很困难，因为它已经非常过时了，目前也主要被当做兽药用于止痛。如果药厂认为该药品不能带来利润，那么他们就不会投钱进行临床实验。这也是为什么在世界上大部分地方，该药仅被当做非专利性止痛药出售。此外，羟基保泰松的确已被证实有毒性。如果有更安全的药物可选，那么它也不是治疗疼痛的必须品。但当治疗TB时，它的主要毒性作用出现的概率比主要副作用出现的概率要小。” 此外，目前抗结核治疗存在的一个主要问题是即使正在接受治疗，结核菌在体内仍可以凭借一种静息（非复制）状态“躲避”治疗。因此了发现可攻击静止状态的结核杆菌的药物，Dr. Nathan的团队首先发现了四种可以使细菌在体内维持静息状态的情形：低氧状态，轻度酸性环境，进食脂质取代糖类，少量的天然保护分子NO。研究团队把这些情形复制到试管里，之后系统地测试了上千种药物的抑菌效果，在测试了5600种药物之后，他们发现了羟基保泰松。 Nitazoxanide是一种高安全性的药物，正在申请专利用于抗感染。据Dr. Nathan说，关于如何实验它对TB的治疗已经开始有争论，但目前这些争论已经停止，源自与oxyphenbutazone同样的问题：在小鼠体内代谢太快，根本无法进行实验。 Dr. Nathan认为在动物体内测试oxyphenbutazone与 nitazoxanide治疗TB完全没必要，因为在实验室中它们的抗TB效果已得到充分证实，而且在人体内的使用也相当安全。对于这种死亡率很高又缺乏治疗手段的传染性疾病来说，它们的使用迫在眉睫。
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  • 《三种分子生物学诊断技术对结核病诊断价值的比较》
    • 来源专题：结核病防治
    • 编译者：李阳
    • 发布时间：2016-03-24
    • 结核病临床表现多样给临床诊断带来了极大困难。实验室检查对于结核病防治及诊断起着不可或缺的作用，包括以全菌体为靶标的病原微生物检测、以细菌核酸为靶标的分子生物学检测和以机体免疫反应及其产物为基础的检测方法，其中分子生物学检测是近些年发展起来的检测方法，具有快速、特异度及敏感度高等特点。基于此，来自西安市结核病胸部肿瘤医院的5名研究人员以于2014年4月至7月期间收集的378份西安市结核病胸部肿瘤医院收治的经病理确诊或细菌学确诊的肺结核患者痰标本为分析样本，采用实时荧光RNA恒温扩增检测技术（SAT）、分枝杆菌核酸检测（PCR-荧光探针，TB-NTM-PCR）和多色巢式荧光定量PCR（Xpert MTB/RIF）同时对同一份痰标本进行检测，并以MTB 960快速液体培养及痰直接抗酸染色镜检结果为金标准来分析SAT法、TB-NTM-PCR法及Xpert MTB/RIF法对MTB的检出率，比较3种检测方法的差异，评估其在临床诊断中的价值，其相关成果发表在《中华结核和呼吸杂志》2015年第38卷第9期。 研究发现，378份痰液标本中涂片阳性93例（24.6％，93/378），MTB 960快速液体培养阳性188例（49.7％，188/378），SSAT、TB-NTM-PCR及Xpert MTB/RIF法检测的总体阳性率分别为37.6％（142/378）、37.8％（143/378）和53.4％（202/378）；痰抗酸染色镜检及MTB分离培养均为阳性（即涂阳培阳）时，SAT、TB-NTM-PCR及Xpen MTB/RIF法检测的阳性率分别为84.6％（77/91）、91.2％（83/91）和96.7％（88/91），且基于x2检验的3种检测方法阳性率间差异有统计学意义（x2=8.014，P=0.0182）；痰抗酸染色镜检阴性而MTB分离培养为阳性（即涂阴培阳）时，SAT、TB-NTM-PCR及Xpen MTB/RIF法检测的阳性率分别为61.9％（60/97）、44.3％（43/97）和80.4％（78/97），且基于x2检验的3种检测方法阳性率间差异有统计学意义（x2=26.864，P＜0.01）；痰抗酸染色镜检阴性且MTB分离培养也为阴性（即涂阴培阴）时，SAT、TB-NTM-PCR及Xpen MTB/RIF法检测的阳性率分别为1.6％（3/185）、6.5％（12/185）和16.8％（31/185），且基于x2检验的3种检测方法阳性率间差异有统计学意义（x2=29.061，P=0.018）；痰抗酸染色镜检阳性而MTB分离培养为阴性（即涂阳培阴）时，SAT、TB-NTM-PCR及Xpen MTB/RIF法检测的阳性例数分别为3/5、5/5及5/5例。此外，以MTB 960快速液体培养和痰直接抗酸染色涂片镜检为金标准，3种检测方法中xpert MTB/RIF法的敏感度（87.6％，163/186）及阴性预测值最高（88.5％，185/209）且漏诊率最低（12.4％，24/193）；SAT法特异度（98.2％，214/218）及阳性预测值最高（97.2％，138/142）且误诊率最低（1.8％，4/218）；以960药敏试验结果为金标准，Xpert MTB/RIF法耐药基因检测的正确率为95.48％（148/155），敏感度为95.5％（128/134），特异度为95.2％（20/21）。 综上所述，SAT、TB-NTM-PCR和Xpert MTB/RIF法对结核病诊断均具有良好的辅助作用，其中Xpert MTB/RIF法无论对涂阳或涂阴肺结核均具有良好的检出率。
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