《华中科大揭示干旱胁迫基因参与甘蓝型油菜油脂积累的机制》

  • 来源专题:转基因生物新品种培育
  • 编译者: zhangyi8606
  • 发布时间:2019-12-31
  • 甘蓝型油菜(Brassica.napus)是*为重要的油料农艺作物之一,研究其油脂的合成和代谢对于培育高含油量的油菜品种具有重要意义。在模式植物拟南芥和甘蓝型油菜中,油脂主要是以甘油三酯(triacylglycerols,TAGs)的形式储存在种子里。目前,针对促进油脂积累研究多集中在甘油三酯合成和降解方面。干旱胁迫会对植物生长产生不利影响,但干旱胁迫响应基因在植物油脂合成和代谢方面的作用与机理则研究相对较少。

    4月10日,华中科技大学生命科学与技术学院栗茂腾教授课题组在Plant Biotechnology Journal在线发表了题为Droughtresponsive genes, late embryogenesis abundant group3 (LEA3) andvicinal oxygen chelate (VOC), function in lipid accumulation inBrassica napusand Arabidopsismainly via enhancing photosynthesis efficiency and reducingROS的研究论文。本文揭示了干旱胁迫基因LEA与VOC可通过提高光合效率,降低活性氧对植物细胞的伤害,从而保证了干旱情况下甘蓝型油菜与拟南芥中含油量的稳定,以及提高了正常环境下种子中油脂的积累。

    LEA作为一个小分子蛋白,在非生物胁迫中可起到稳定细胞膜结构和中和因胁迫脱水而增加的离子的作用,从而使得细胞内的胞内渗透压环境保持稳定。甲基乙二醛(methylglyoxal,MG)是碳水化合物和油脂新陈代谢过程中产生的有害副产物,VOC基因主要编码蛋白为甲基乙二醛酶I(GlyoxalaseI,GLYI),其可在谷胱甘肽的作用下可以对MG起到降解和转化,从而帮助植物应对非生物胁迫。在这项*新的研究中,栗茂腾教授研究团队首先从甘蓝型油菜(AACC,2n=38)克隆了干旱胁迫相关基因BnLEA和BnVOC各4个拷贝,以及拟南芥同源的AtLEA与AtVOC基因,并分别构建了种子特异表达启动子和CaMV35S启动子的超表达载体;结果显示在拟南芥中超表达LEA和VOC基因的转基因后代不仅抗旱性增强,而且种子含油量也有了显著提高。同时,种子千粒重也有所提高;而拟南芥atlea3突变体和AtVOC基因的RNA干扰后代在干旱胁迫下的抗旱性和含油量则均明显下降,突变体遗传回补则可明显使抗旱性和含油量表型回补。热成像与显微切片结果显示,atlea3与AtVOC-RNA干扰后代的种子发育和叶表形态温度等均会受到干旱影响。同时,在甘蓝型油菜中也进行了多个拷贝的BnLEA与BnVOC的超表达载体、BnLEA与BnVOC的RNA干扰载体进行了遗传转化,在转基因后代出现了相应的抗旱性与含油量的表型。并且,相比于正常生长栽培环境,在干旱胁迫的情况下,LEA与VOC基因的对含油量对作用效果更为显著。为进一步验证LEA与VOC基因的功能,对单基因的拟南芥和甘蓝型油菜转基因后代均进行了杂交,包括正向调控株系和反向调控株系。相比于单基因的转基因后代,杂交后代的含油量表型变化更为显著。这说明作用机制不同的干旱胁迫响应基因均可对植物油脂的积累产生影响。

    为揭示干旱胁迫基因在油脂积累中的作用机理,本文选取超表达BnLEA,BnVOC,AtLEA,AtVOC以及atlea3突变体和AtVOC-RNAi植株的种子和叶片,进行了长期和短期干旱胁迫下多个组合的转录组测序分析。结果表明,LEA基因可使光合作用相关路径、油脂合成网络路径上的基因表达上调;而VOC基因则可在油脂降解、乙醛酸代谢以及含氧化合物代谢网络上起到作用。针对转录组测序获得的差异表达结果,通过进一步的光合效率测定以及活性氧代谢系统中相关酶学和代谢物实验验证,证实了LEA基因可以在干旱胁迫的情况下,通过稳定细胞膜结构,使得胁迫环境下油脂合成可以正常进行,并有效提高光合效率,产生更多的有机物供给,实现植物油脂合成的增加。VOC基因可以降低甲基乙二醛和活性氧的含量,并使下游的油脂降解降低,从而促进了植物种子中油脂的积累。本研究结果为油料作物的含油量的改良育种提供了新的思路和依据。

    本论文的通讯作者为华中科技大学栗茂腾教授,*作者为梁语博士,来自华中科技大学的大学生创新创业训练计划项目小组成员,山东师范大学,湖北工程学院,黄冈师范学院的研究者也参加了相关研究工作。本研究得到国家973项目、国家重点研发计划和国家自然科学基金等项目的资助。

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    •   本研究通过整合转录组、全基因组亚硫酸氢盐测序(WGBS)和染色质免疫沉淀测序(ChIP-seq)技术,系统解析了苹果(Malus hupehensis)在干旱胁迫下6种组蛋白修饰(H3ac/H3K9ac/H3K14ac/H3K4me3/H3K27me3/H3K36me3)与DNA甲基化的动态互作规律,发现MdABI5(受H3K14ac/H3K27me3干旱胁迫下的表观基因组景观解析)      动态基因表达变化     在苹果幼苗遭受干旱处理的第6天(A6d),转录组分析检测到3818个差异表达基因(DEGs),显著富集于水分剥夺、离子稳态和茉莉酸生物合成通路。值得注意的是,TIFY10A-like等4个基因呈现持续上调或下调表达模式。长链非编码RNA(lncRNA)分析揭示其通过ceRNA机制调控TPL等抗旱相关基因,57.8%的DEGs可能受lncRNA与microRNA的协同调控。      DNA甲基化动态特征     全基因组甲基化测序(WGBS)显示mCG/mCHG/mCHH三种甲基化类型在干旱3天(A3d)即显著升高,其中启动子区mCHH升高最显著。差异甲基化区域(DMRs)相关基因富集于ABA信号通路,CIPK6等基因的甲基化变化与表达量呈负相关。DNA去甲基化酶ROS1-like的表达波动可能介导了甲基化动态变化。     组蛋白修饰调控网络     ChIP-seq揭示6种组蛋白修饰在基因区的分布特征:激活型标记H3K4me3与H3K9ac在TSS区富集度降低,而抑制型标记H3K27me3的缺失与高表达基因相关。2493个差异组蛋白修饰区域(DHMRs)基因中,28.8%呈现表达变化,其余可能通过染色质开放度调控抗旱响应。表观修饰协同分析发现,H3K4me3倾向于调控低倍数变化的上调基因,而H3K27me3缺失主导高倍数变化基因激活。 关键基因功能验证 MdABI5基因上游H3K14ac富集增加和H3K27me3减少共同驱动其表达上调。转基因实验证实过表达MdABI5株系具有更高的存活率(提升2.1倍)、CAT活性(增加58%)和光合速率,离子渗漏率降低37%。MdOCP3则受H3K9ac/H3K36me3下调调控,其过表达株系表现出更强的保水能力(RWC提高24%)和抗氧化能力(H2O2积累减少42%),与拟南芥ocp3突变体表型相反。 分子调控机制 表观修饰在ABA信号通路中呈现层级调控:PYLs/PP2Cs/SnRKs等核心组分受DNA甲基化和组蛋白修饰双重调控;转录因子级联网络中,MYB88(H3K4me3调控)、NCED3(H3K27me3调控)等关键节点均受表观修饰精细调控。特别发现DREB1家族成员受多修饰协同调控,其中DREB1B同时响应H3K4me3/H3K9ac/H3K36me3三种修饰。 这项研究首次绘制了苹果干旱响应的全基因组表观遗传图谱,揭示了组蛋白密码与DNA甲基化的时空动态规律,为利用表观遗传育种提升作物抗逆性提供了理论依据和分子靶点。
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