《显微镜观察药敏法检测结核分枝杆菌耐药性》

  • 来源专题:结核病防治
  • 编译者: 李阳
  • 发布时间:2015-04-22
  • 目的:评价显微镜观察药敏法( microscopic observation drug susceptibility,MODS)检测结核分枝杆菌临床分离株异烟肼( INH)和利福平( RFP)耐药性的可行性。

    方法:使用MODS技术对本医院的共201株结核菌临床分离株分别进行INH、RFP的耐药性检测,并与罗氏比例法作比较。

    结果:MODS法检测平均时间为8d,以罗氏比例法为金标准,INH的灵敏度和特异性分别为98.5%和100.0%,RFP的灵敏度和特异性分别为99.3%和100%。

    结论:MODS法检测结核分枝杆菌对异烟肼和利福平的耐药性具有成本低、快捷、操作简便、准确等优点,为结核耐药检测提供了一种较好的方法。

    信息来源:黄飞,陈俊林,顾德林.显微镜观察药敏法检测结核分枝杆菌耐药性.临床肺科杂志,2015,20(5):801-804.

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    • 来源专题:结核病防治
    • 编译者:李阳
    • 发布时间:2016-04-08
    • 结核病的诊断主要依靠痰涂片抗酸染色和结核杆菌(Mtb)培养,但痰涂片敏感度较低而Mtb培养和药敏试验耗时较长,且易延误诊断或漏诊。随着分子生物学诊断技术的不断发展,利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(Xpert Mtb/RIF)可以在2 h内直接从临床样品中检测到结核杆菌复合物(MTBC)与利福平(RIF)耐药性,在多个国家的评估性研究中显示出高度敏感性和特异性,并得到WHO的认可和推荐。基于此,来自浙江省衢州市人民医院的6名研究人员通过对2014年10月至2015年3月在该院就诊的疑似肺结核患者进行连续6个月监测,并对痰液样本同时进行抗酸染色镜检、液体MGIT培养和Xpert Mtb/RIF检测,评估了Xpert MTB/RIF在检测Mtb及其利福平耐药性中的应用效果,其相关成果发表于《中华临床感染病杂志》2016年第9卷第1期。 研究初期纳入疑似肺结核患者共713例,后因各种原因(Xpert MTB/RIF检测失败8例、液体培养污染39例、重复患者12例、诊断不明确2例)有61例患者未得到完整实验结果,故实际纳入统计分析的患者例数为652例。 结果显示: 1. 参照肺结核诊断标准(WS288-008)、临床表现、胸部影像学及实验室检查,399例确诊为肺结核(男性274例,女性125例,平均年龄为57.1岁)、11例非结核分枝杆菌、242例无结核;Xpert MTB/RIF检测阳性151例,其中诊断为肺结核149例、肺癌1例、肺部感染1例;Xpert MTB/RIF、痰涂片镜检和MGIT培养检测结核分枝杆菌的敏感度和特异度分别为37.3%(149/399)和99.2%(251/253)、17.0%(68/399)和98.8%(250/253)、37.8%(151/399)和95.6%(242/253)。其中,Xpert MTB/RIF检测的敏感度显著高于涂片镜检(χ2=50.9,P<0.01),但与MGIT培养相比,差异无统计学意义(χ2=0.5,P>0.05)。而三种方法的特异度比较,差异无统计学意义(P>0.05); 2. 按涂片镜检和培养结果进行分类,Xpert MTB/RIF检测的敏感度分别为98.6%(68/69)(涂阳培阳)、87.9%(73/83)(涂阴培阳)和3.2%%(8/247)(涂阴培阴)。此外,8份Xpert MTB/RIF检测阳性但培养和涂片均为阴性样本的平均ct值为28.1; 3. 对Xpert MTB/RIF检测和MGIT培养均为阳性的141例进行利福平耐药性检测,其中Xpert MTB/RIF检出利福平耐药12例。以液体药敏法为金标准,Xpert MTB/RIF检测利福平耐药敏感性为100%(9/9)、特异性为97.3%(129/132)。 综上所述,Xpert MTB/RIF检测痰液中结核分枝杆菌具有较高的敏感性和特异性,操作简单,生物危害度小,虽然在检测利福平耐药性方面与参考方法存在一定差异,但其2h就可预测利福平耐药性的特点,相对于需要漫长时间等待Mtb培养和药敏结果来说,对于临床快速诊断和治疗肺结核具有重要意义。
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    • 编译者:蒋君
    • 发布时间:2019-06-24
    • 使用162株存档的结核分枝杆菌复合物(MTBC)分离株,评估了内部开发的吡嗪酰胺(PZA)抗性的pncA测序,其具有通过BACTEC MGIT 960 PZA试剂盒明确定义的表型PZA易感性谱和PZase活性。初步结果显示,pncA测序与存档分离株中的表型PZA药物敏感性试验(DST)之间100%一致。同时,前瞻性收集了637份呼吸道标本,其中158份报告为MTB阳性,采用Abbott Realti m MTB检测(96.3%敏感性[95%Cl:92.2-98.7%]; 100%特异性[95%CI:99.2-100.0%] )。分别用pncA测序和BACTEC MGIT 960 PZA试剂盒分析158例MTBC阳性标本的基因型和表型PZA耐药谱。对于PZA耐药,pncA测序在4个工作日内检测到5/5(100%)表型PZA耐药呼吸道标本中的pncA突变。PZA敏感标本中未检测到pncA突变。将存档的分离物与前瞻性标本组合,27株被鉴定为具有pncA突变的表型PZA抗性。在这27个样品中,6/27(22.2%)的表型菌株PZA耐药菌株携带新的pncA突变,没有RPSA和PAND突变。在pncA结构基因中包含5个突变(Del383T, Del380-390, A-Ins at 127, A-Ins at 407 and G-Ins at 508),在pncA启动子区域包含的1个突变(T-12C)。所有这六种菌株都没有或降低PZase活性,表明新突变可能赋予PZA抗性。另外,25/27表型PZA抗性菌株被证实是耐多药结核病(MDR-TB)。由于PZA常用于MDR-TB治疗方案,因此pncA直接测序可快速检测PZA耐药性,并有助于PZA在治疗PZA易感MDR-TB中的明智使用。