《使用pncA PCR测序直接检测结核分枝杆菌对吡嗪酰胺的耐药性》

  • 来源专题:结核病防治
  • 编译者: 蒋君
  • 发布时间:2019-06-24
  • 使用162株存档的结核分枝杆菌复合物(MTBC)分离株,评估了内部开发的吡嗪酰胺(PZA)抗性的pncA测序,其具有通过BACTEC MGIT 960 PZA试剂盒明确定义的表型PZA易感性谱和PZase活性。初步结果显示,pncA测序与存档分离株中的表型PZA药物敏感性试验(DST)之间100%一致。同时,前瞻性收集了637份呼吸道标本,其中158份报告为MTB阳性,采用Abbott Realti m MTB检测(96.3%敏感性[95%Cl:92.2-98.7%]; 100%特异性[95%CI:99.2-100.0%] )。分别用pncA测序和BACTEC MGIT 960 PZA试剂盒分析158例MTBC阳性标本的基因型和表型PZA耐药谱。对于PZA耐药,pncA测序在4个工作日内检测到5/5(100%)表型PZA耐药呼吸道标本中的pncA突变。PZA敏感标本中未检测到pncA突变。将存档的分离物与前瞻性标本组合,27株被鉴定为具有pncA突变的表型PZA抗性。在这27个样品中,6/27(22.2%)的表型菌株PZA耐药菌株携带新的pncA突变,没有RPSA和PAND突变。在pncA结构基因中包含5个突变(Del383T, Del380-390, A-Ins at 127, A-Ins at 407 and G-Ins at 508),在pncA启动子区域包含的1个突变(T-12C)。所有这六种菌株都没有或降低PZase活性,表明新突变可能赋予PZA抗性。另外,25/27表型PZA抗性菌株被证实是耐多药结核病(MDR-TB)。由于PZA常用于MDR-TB治疗方案,因此pncA直接测序可快速检测PZA耐药性,并有助于PZA在治疗PZA易感MDR-TB中的明智使用。

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    • 来源专题:重大疾病防治
    • 编译者:蒋君
    • 发布时间:2019-10-28
    • 结核分枝杆菌烟碱酰胺酶/吡嗪酰胺酶(PZAse)是一种催化烟酰胺/吡嗪酰胺转化为烟酸/吡嗪酸的金属酶。研究人员调查了金属伴侣是否能产生最佳的PZAse活性。 通过金属消耗(给予PZAse-MT-Apo和PZAse-EC-Apo)灭活结核分枝杆菌和大肠杆菌PZAase(分别为PZAse-MT和PZAse-EC)。测量了大肠杆菌金属伴侣蛋白ZnuA或Rv2059(结核分枝杆菌类似物)的再活化。对ZnuA和Rv2059进行蛋白水解和热处理后,重复进行此操作。剔除CDC1551结核分枝杆菌参考菌株的Rv2059编码基因,并测量PZA敏感性和POA外排率。 200μMZnuA实现了65%的PZAse-EC-Apo再激活。1μMRv2059和1μMZnuA分别实现了69%和34.3%的PZAse-MT-Apo再激活。ZnuA和Rv2059的蛋白水解处理,以及对ZnuA施加三种热冲击(但不对一种冲击),显著降低了重新激活PZAse-MT-Apo的活化能力。结核分枝杆菌Rv2059敲除菌株是Wayne阳性,易感PZA,尽管在敲除后观察到POA流出速率有降低的趋势,但与参考菌株相比没有显著差异。 金属伴侣蛋白Rv2059可在体外恢复金属的PZAse的活性。尽管Rv2059在体外效果显著,但它似乎对体内PZA敏感性的影响较小。这可能使结核分枝杆菌对吡嗪酰胺的作用机理和耐药性有重要意义。需要进一步研究来证实。 结核病是一种由结核分枝杆菌引起的传染病,是世界范围内引起疾病和死亡的主要原因之一。吡嗪酰胺是用于治疗结核病的关键药物,但其作用机理尚未完全明了,并且使用目前可用的工具无法很好地测试结核分枝杆菌菌株对吡嗪酰胺的耐药性。这项研究的意义在于,一种金属伴侣蛋白可能对吡嗪酰胺的作用和抵抗机制至关重要。这可能有助于开发改进的工具来检测吡嗪酰胺耐药性。这将对结核病患者的临床管理产生重大影响:针对患者个体菌株的耐药性进行适当调整的药物治疗方案,可带来更好的临床结果,减少感染的进一步传播,并减少耐药菌株的发展。这些菌株更具挑战性且治疗费用昂贵。
  • 《我国吡嗪酰胺耐药性结核杆菌的流行及传播》

    • 来源专题:结核病防治
    • 编译者:李阳
    • 发布时间:2016-03-11
    • 吡嗪酰胺(PZA)是一种重要的一线抗结核药物,然而有关我国PZA耐药率的相关数据相对较少。基于此,来自上海市疾病预防控制中心、中国科学院上海巴斯德研究所以及复旦大学上海医学院等机构的研究人员以2009年6月至2012年6月从我国5个地区搜集的493例结核杆菌临床分离株为样本,通过开展pncA基因测序来探讨吡嗪酰胺的耐药状况,其相关成果于2016年3月3日发表在Tuberculosis上。 结果显示,在泛敏感菌株中吡嗪酰胺耐药率为1.0%(2/196),在异烟肼(INH)单耐药菌株中吡嗪酰胺耐药率为3.1%(4/130),在利福平单耐药菌株中吡嗪酰胺耐药率为14.0%(6/43),在多重耐药(MDR)菌株中吡嗪酰胺耐药率为43.5%(54/124);多重耐药结核病、利福平单耐药以及再治疗被认为是与吡嗪酰胺耐药相关的危险因素。此外,通过对新诊断吡嗪酰胺耐药结核病患者以及等位pncA基因发生突变的集群菌株进行分析发现吡嗪酰胺耐药分离菌株的传播对吡嗪酰胺耐药结核病的出现影响重大。 综上所述,有必要对多重耐药结核菌株进行药敏试验并对治疗方案进行相应地完善。