《FISH-TAMB,一种无需固定细胞的mRNA 荧光标记技术》

  • 来源专题:中国科学院文献情报系统—海洋科技情报网
  • 编译者: liguiju
  • 发布时间:2022-01-24
  • 近期中国科学院深海科学与工程研究所地外海洋系统研究室刘翠艳研究员作为共同通讯作者在微生物生态学期刊Microbial Ecology上在线发表论文一篇,题为 FISH-TAMB, a Fixation-Free mRNA Fluorescent Labeling Technique to Target Transcriptionally Active Members in Microbial Communities。研究人员开发了一种适用于标记古菌和细菌的信使RNA(mRNA)的荧光原位杂交(FISH)技术。FISH-TAMB 方法与现有 FISH 方法的不同之处在于缓冲液中不含固定剂或表面活性剂,在目标细胞的生长温度下杂交时间短至 15 分钟,并且省略了洗涤步骤。论文详细地介绍了 FISH-TAMB 的制备和应用例子。通过对(1) 表达产甲烷菌 Methanosarcina barkeri mcrA基因的大肠杆菌; (2) M. barkeri;和(3) 来自深部大陆钻孔的厌氧甲烷营养 (ANME) 富集培养,证明了FISH-TAMB 标记细胞内 mRNA 靶标、区分转录状态、检测活跃和稀有分类群以及保持细胞活力的能力。FISH-TAMB 具有多复用和可应用于16S rRNA的潜力,在环境微生物学领域具有潜在的广泛应用。

    原文链接:

    https://link.springer.com/article/10.1007/s00248-021-01809-5

  • 原文来源:http://www.idsse.cas.cn/yjjz2015/2021/202201/t20220118_6345252.html
相关报告
  • 《超光稳定荧光标记剂,超分辨显微镜》

    • 来源专题:纳米科技
    • 编译者:郭文姣
    • 发布时间:2017-08-21
    • (Nanowerk新闻)超级分辨率荧光显微技术,已被2014年诺贝尔化学奖认可,允许我们将生物系统可视化,并获得对生物分子复杂动态的详细了解。特别是,由于其快速的获取速度和对各种生物样品的相容性,刺激的排放耗竭(STED)显微镜被广泛用于对生活系统中的各种过程进行检查。 名古屋大学变革性生物分子研究所的化学家们发明了一种新的光稳定荧光染料,即PhoxBright 430(PB430),这种荧光染料能够连续地处理荧光标记细胞的超分辨率成像。由于PB430含有一种功能上的滋润,可以让抗体结合,在细胞内特定的生物分子目标可以被免疫荧光染色。PB430的优异的耐光性已经被证明是有用的在构建一个3 dst段的形象微管(管状蛋白细胞骨架结构形式,这是一个细胞)的内部框架,实现多色、成像的荧光immunolabeled骨骼的组合photostable PB430和商用染料。 ——文章发布于2017年8月17日
  • 《介绍一种更温和,更温和的方法在细胞中打洞》

    • 来源专题:纳米科技
    • 编译者:郭文姣
    • 发布时间:2019-04-01
    • 当科学家们试图将大分子(如Cas9酶,CRISPR基因编辑的关键)植入细胞时,事情就会变得一团糟。 一种流行的技术,体电穿孔,涉及到用电流冲击细胞。这使得细胞里到处都是洞,让任何东西都能进去。脆弱的细胞,比如人类的t细胞,并不总是能在这个过程中存活下来。 科学家们有时会把编码蛋白质的DNA送进来,而不是送进大的蛋白质。为此,病毒通常会起作用,但大多数病毒仍然受到人类安全问题的困扰。腺相关病毒(AAV)已经被美国食品和药物管理局(Food And Drug Administration,简称fda)批准用于临床,体积太小,无法携带大块DNA。 加州大学伯克利分校(University of California, Berkeley)的纳米材料科学家开发了一种新技术,利用廉价的实验室设备将大分子高效注入细胞,克服了这些障碍。这种技术被称为纳米孔电穿孔(nanoore -electroporation,简称nanoEP),它在每个细胞中轻轻地制造了不到12个小孔,这些小孔足以让分子进入细胞,而不会对细胞造成损伤。毛孔很快就愈合了。在测试中,超过95%的细胞在这个过程中存活了下来。 加州大学伯克利分校博士后曹玉红(音译)表示:“将大分子导入细胞是一种更简单、更安全、更高效、更廉价的方法。”曹玉红是本周发表在《美国国家科学院院刊》(Proceedings of the National Academy of Sciences)网络版上的一篇有关这项技术的论文的主要作者。 为了在细胞膜上制造纳米孔,曹采用了一种标准的实验室设备:一种价格低廉的商用滤水器,其孔径只有100纳米——小得连头发都穿不进去。它们被用来过滤液体中的大颗粒或分子。 她在滤水器上培养细胞,然后施加一个非常低的电压,只在滤水器上的小孔处产生细胞膜上的小孔。通常,在一滴含有成千上万个细胞的液体中,每个细胞会产生大约10个小孔。 电压还会将过滤器另一侧的大分子通过小孔拉入细胞。 曹说:“这项技术可以有效地递送各种荧光标记的功能蛋白,效率约为80%。” 她还能够通过传递Cas9蛋白和引导RNA(这两种都是大型核糖核酸蛋白),在保持T细胞高存活率的同时,对一种名为Jurkat细胞的人类T细胞细胞系进行基因编辑。 到目前为止,纳米ep只在永生细胞中进行了测试,理论上,它应该适用于任何类型的细胞,比如将Cas9等大分子注入胚胎,或者改变人类t细胞进行免疫治疗。而且输送方法不需要专门的设备或缓冲溶液。曹的最终目标是生产一种廉价、易用的临床工具,为CAR(嵌合抗原受体)t细胞免疫治疗癌症提供安全有效的Cas9。 ——文章发布于2019年3月29日