《用于上呼吸道病毒病原体筛查和鉴别诊断的抗体微阵列免疫测定。》

  • 来源专题:实验室生物安全
  • 编译者: 张虎
  • 发布时间:2019-12-01
  • 上呼吸道感染是世界上最常见的传染病。实际上,上呼吸道感染(URTIs)背后的病原体是各种各样的病原体,例如流感,副流感,腺病毒,鼻病毒等。已知涉及200多种病原体。病毒感染的鉴别诊断有时会因其临床表现的多样性或相似性而变得复杂。这项工作致力于开发一种能够同时检测六种常见病毒性URTI病原体的方法:IAV; IBV; RSV; hAdV; hPIV2;和hPIV3。利用抗体微阵列技术来完成分析。在准备蛋白质微芯片的过程中,我们生产,鉴定并选择了约50种单克隆抗体;对于每个上述病原体,选择了最佳的单克隆抗体对。创建了蛋白质微芯片,并优化了其核心工作条件。考虑到便利性和最大测定灵敏度之间的平衡,开发了一种一步分析方法,用于在制造的微芯片(抗体微阵列)上完成ELISA样的“三明治”相互作用。参考病毒株用于确定检测的下限(LoD)。对于IAV,LoD为0.25µng / ml总病毒蛋白。对于其他病毒,LoD范围为总蛋白的1-2 ng / ml。这些灵敏度限度比标准ELISA的限度稍好,但不如PCR的限度。总的来说,我们认为开发的微芯片是现有方法的良好替代品,可以相对快速(过夜),廉价,同时筛选几种病原体。抗体微阵列的设计有利于进一步的开发,并且分析病原体的面板可以扩展到包括大约50个成员。

  • 原文来源:https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/31783022
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  • 《《病毒性脑(膜)炎病原体诊断技术应用专家共识》发表》

    • 来源专题:新发突发传染病
    • 编译者:张玢
    • 发布时间:2023-07-08
    •   2023年3月7日,中华医学杂志发表了中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所许松涛研究员、中国医学科学院北京协和医院关鸿志教授、国家儿童医学中心(北京)首都医科大学附属北京儿童医院谢正德教授与同国内病毒学、传染病学、临床医学及医学检验等领域的35位专家反复讨论制定《病毒性脑(膜)炎病原体诊断技术应用专家共识》(下文称为《共识》)。《共识》从国内外病毒性脑(膜)炎病原种类、检测技术及检测策略等方面进行阐述,提出针对我国病毒性脑(膜)炎病原体的检测策略和方案,为病毒性脑(膜)炎的临床诊断以及疾病预防控制提供参考。《共识》在以下五方面提出重要认识:   一、引起病毒性脑(膜)炎的病原体种类   (1)单纯疱疹病毒是成人病毒性脑炎最常见的病原体;   (2)肠道病毒是我国儿童群体病毒性脑(膜)炎的主要病原体;   (3)我国乙脑发病率逐年下降,但仍是虫媒病毒引起的最重要的病毒性脑炎。   二、病毒性脑(膜)炎实验室检测的标本类型   (1)脑脊液标本主要用于病毒核酸检测,应尽量采集患者急性期的脑脊液样本;   (2)血清标本主要用于抗体的测定,应尽量采集患者急性期、恢复期双份血清;   (3)其他标本:根据患者症状,如出现疱疹时,可采集疱疹液或结痂标本;出现呼吸道症状时,可采集鼻咽拭子或肺泡灌洗液;出现腹泻、腹痛等症状时,可采集粪便标本。   三、病毒性脑(膜)炎病原体检测技术   (1)病毒性脑(膜)炎病原临床检测技术主要有病毒核酸检测和抗体检测;   (2)脑脊液病毒核酸检测包括PCR与mNGS,是目前病毒性脑(膜)炎病因确诊的主要方法;   (3)抗病毒抗体(IgM)检测对乙型脑炎、西尼罗脑炎以及蜱传脑炎具有重要诊断意义。   四、病原体检测策略   病原体检测优先级:   (1)第一组优先病原:主要包括HSV-1和HSV-2、VZV、肠道病毒、流行性乙型脑炎病毒(夏秋季节优先,以抗体IgM检测为主);   (2)第二组病原:包括腮腺炎病毒、EBV、CMV、发热伴血小板减少综合征病毒、HHV-6;   (3)第三组病原:包括腺病毒、麻疹病毒、风疹病毒、流感病毒、狂犬病毒、HHV-7、人双埃可病毒(<3岁儿童)、西尼罗病毒(新疆及其周边地区)、蜱传脑炎病毒(东北地区,有明确蜱叮咬史)。   病原体检测策略:   (1)根据患者年龄和发病季节,选择常见优势病原体进行检测,可采用单重PCR或者多重PCR;   (2)若PCR检测阴性,或者PCR不可及,也可应用mNGS技术;   (3)对于病因不明的慢性中枢神经感染或免疫功能缺陷的脑(膜)炎患者,建议首选脑脊液mNGS检测。并建议对mNGS阳性结果通过PCR或者血清学等方法进行验证。   五、其他   (1)加强研发适用于基层医院的病毒性脑(膜)炎检测试剂;   (2)推进研发创新型多重检测试剂;   (3)建立健全病毒性脑(膜)炎监测网络,推进病毒性脑(膜)炎纳入国家疾病监测系统。
  • 《免疫监测研究为大流行后呼吸道病毒的回归提供了新的见解》

    • 来源专题:重大慢性病
    • 编译者:李永洁
    • 发布时间:2025-08-18
    • 根据结合抗体数据,按年龄和感染力量估计每次就诊时的血清阳性率。一项多年临床研究的第一篇论文发表在《柳叶刀传染病》上。文章“2019冠状病毒大流行(2022-2023)后美国儿童中地方性病毒再次出现的动态:一项前瞻性、多中心、纵向、免疫流行病学监测研究”,展示了该方法如何改进建模,以更好地预测未来的疫情。这篇论文分享了一项多中心临床研究的结果,这是最近启动的由美国国立卫生研究院(NIH)疫苗研究中心(VRC)的Daniel Douek博士领导的前提(通过微生物和免疫监测和流行病学的大流行反应库)项目的许多研究之一。在2022-2023年这一研究的第一年收集的数据首次显示,在大流行期间,针对SARS-CoV-2的掩蔽和隔离等非药物干预措施如何降低了儿童常见呼吸道病原体的传播率和人群免疫力。该研究为推动这些疾病在大流行后大幅反弹的原因提供了新的循证见解,并使人们能够对未来进行更准确的预测。这项研究是由医学博士、科罗拉多儿童医院传染病专家、科罗拉多大学安舒茨医学院和科罗拉多儿童医院的中心站点以及北卡罗来纳大学、威尔康奈尔医学院和阿拉巴马大学伯明翰分校的临床研究站点的首席研究员Kevin Messacar和学术机构的临床研究站点合作进行的。PREMISE研究对10岁以下的儿童进行了免疫监测,招募他们并对他们进行了一年多的跟踪。通过重复的血液采样,研究小组可以确定不同年龄的儿童对什么有免疫力,对什么有易感性。通过疾病期间的呼吸采样,研究人员能够确定他们经历了哪些感染。数据显示,在大流行期间,大多数年幼的儿童缺乏对许多正常呼吸道病毒的免疫力,这表明由于采取了预防措施,他们没有像通常那样受到感染。在取消大流行措施之后,所研究的所有病原体的免疫水平都有所提高,这反映了大流行结束后这些病毒在儿童中前所未有地广泛复活。虽然大多数研究针对的是一种特定疾病,但对来自PREMISE的样本进行了许多常见和新出现的呼吸道病毒检测,包括RSV、流感和肠道病毒D68 (EV-D68),后者可导致脊髓灰质炎样疾病——急性弛缩性脊髓炎。这些数据使专家能够以更高的准确性和精度重建过去的传播模式和对未来疫情的模型预测。他们表明,2022-23年的PREMISE数据可用于准确预测2024年发生的新兴病原体EV-D68的后续疾病浪潮。“四组近1000名儿童提供了宝贵的样本和数据库,”主要作者Hai Nguyen-Tran医学博士说,他是科罗拉多儿童医院的传染病专家和科罗拉多大学医学院的助理教授。“这些正被用于开发‘现成的’医疗对策,如针对感兴趣的病原体的抗体治疗和疫苗。这项研究不是从零开始,而是让我们提前开始了解、预测和准备未来的流行病。“来自PREMISE研究的样本和数据也将用于了解人体免疫系统攻击的病毒的哪些部分变得免疫,因此团队可以更好地设计新的抗体治疗方法和有效的疫苗来模拟这种反应。”在未来,这种类型的免疫监测可以用来更好地了解公共干预对人群免疫和未来疾病浪潮的影响,”梅萨卡尔博士说,他也是科罗拉多大学医学院的教授。“PREMISE是美国国立卫生研究院科学家与学术界临床研究人员成功合作的一个很好的例子,导致了可以直接影响公众健康的具体成果,如候选疫苗和单克隆抗体。”