《口蹄疫病毒的细胞培养繁殖:结构蛋白中的自适应氨基酸取代及其功能含义。》

  • 来源专题:实验室生物安全
  • 编译者: 苑晓梅
  • 发布时间:2019-11-30
  • 口蹄疫是非洲和亚洲大部分地区牲畜的地方病,是造成粮食不安全的重要因素,也是农业发展和动物产品国际贸易的主要障碍。 实际上,所有市售疫苗都是在细胞培养中生产的灭活的全病毒疫苗,但是使病毒的现场分离株适应培养中的生长既费力又费时。 对于针对新兴病毒谱系的疫苗的开发,这尤其令人担忧,因为从病毒分离株到疫苗的较长交货时间可能会延迟有效控制程序的实施。

  • 原文来源:https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/31776851
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    • 编译者:张玢
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    • 病毒感染和复制受宿主细胞异质性影响,但其影响机制尚不清楚。使用单细胞分析,本文研究了宿主细胞异质性(包括细胞大小,包含和细胞周期)对口蹄疫病毒(FMDV)感染(急性和持续感染)和复制的影响。在FMDV感染的细胞中检测到各种病毒基因组复制水平。大量细胞和含有大量内含物的细胞产生更多的病毒RNA拷贝和病毒蛋白,并且比其他细胞具有更高比例的传染性细胞。还发现G2/M细胞中的病毒滴度比其他细胞周期中的高10至100倍,并且确定了细胞大小,包含和细胞周期异质性之间的强相关性,这些均影响感染和FMDV的复制。此外,证明了由于FMDV整联蛋白受体表达水平的差异,宿主细胞异质性影响了FMDV的吸附。总的来说,这些结果进一步加深了我们对单个宿主细胞中病毒进化的理解。 了解宿主细胞异质性如何影响病毒感染和复制很重要。使用单细胞分析发现病毒基因组复制水平在口蹄疫病毒(FMDV)感染的细胞中表现出显着的变异性。还发现细胞大小异质性,包涵体数量和细胞周期状态之间有很强的相关性,并且所有这些特征都会影响FMDV的感染和复制。此外,发现宿主细胞异质性影响病毒吸附作为FMDV整合素受体表达水平的差异。本研究为FMDV感染机制与宿主细胞之间相关性研究提供了新思路。
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    • 编译者:张虎
    • 发布时间:2019-11-26
    • 在口蹄疫(FMD)爆发期间,潜在传染性样品(包括可疑病变的上皮)的运输和测试存在生物安全风险,尤其是在无FMD的国家。因此,在运输前使病毒灭活的治疗很重要。来自感染了O型血清型FMD病毒(FMDV)的牛的舌上皮(O ALG / 3/2014-血统O / ME-SA / Ind-2001d)或A(A IRN / 22/2015-血统A / ASIA / G- VII)在室温下在RNAlater,RNA Shield或磷酸盐缓冲盐水(pH 7.4)中孵育2、6、24或48 h。孵育后,将组织匀浆并通过病毒滴定进行测试。通过RT-qPCR对匀浆中的病毒RNA进行定量,用于测序,然后转染至LFBKαVβ6细胞中以回收感染性病毒。 RNAlater在24小时后孵育48小时后,IRN / 22/2015滴度降低4 log10,而在48小时孵育后完全降低。虽然在2、6和24 h后通过VI检测到O ALG / 3/2014,但滴定没有产生传染性病毒,这可能是冻融的结果。 RNA Shield在高浓度下具有细胞毒性,但在24小时后能有效灭活这两种菌株。无论试剂或灭活期长短,都可以进行RT-qPCR,VP1测序和RNA转染以恢复感染性病毒。 RNA Shield似乎是组织中FMDV失活的更好选择,但是建议24小时孵育。