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《开发一种可在胞内筛选能够抑制人巨噬细胞内结核杆菌生长的新型化合物的方法》

  • 来源专题：结核病防治
  • 编译者： 李阳
  • 发布时间：2016-03-24

  • 近期，来自英属哥伦比亚大学和葛兰素史克西班牙公司的研究人员合作开发了一种用于发现人巨噬细胞内抗结核活性化合物的细胞内高通量筛查技术，并对该技术的筛查效果进行了验证，其相关成果于2015年10月26日发表在Antimicrobial Agents and Chemotherapy上。

    该技术包括两个部分，其一是以荧光素酶为基础的初步鉴定筛查，其二是以绿色荧光蛋白（GFP）为基础的二次分析。研究人员以标准抗结核药物和158种先前被确认的活性抗分枝杆菌化合物为分析样本来评估该筛查技术的鲁棒性，相关数据显示该技术是一种短时效、有价值的新型抗分枝杆菌化合物发现工具。

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  • 《一种能够有效抵抗活动性及非复制型结核杆菌的抗结核药物——新型异柠檬酸裂合酶（ICL）抑制剂的鉴定》
    • 来源专题：结核病防治
    • 编译者：李阳
    • 发布时间：2016-05-30
    • 近期，来自中国医学科学院医药生物技术研究所以及北京胸科医院等机构的研究人员合作筛选及鉴定了有效抗结核药物——新型异柠檬酸裂合酶（ICL）抑制剂，并明确了其抑制特性、抗结核活性以及相关的作用机制，其相关成果于2016年1月5日发表在Tuberculosis上。 研究首先对结核杆菌重组型异柠檬酸裂合酶进行了表达及纯化，用于接下来的高通量筛选以及相关试验；然后通过对71765种复合物进行筛选来鉴定ICL抑制剂，并对其抗结核效果进行评估；为了明确ICL抑制剂对潜伏性结核杆菌持续感染的抑制特征，研究人员还采用感染海分枝杆菌BAA-535菌株的小鼠J774A.1细胞建立了巨噬细胞模型，并对其进行了评估；之后，研究分析了ICL抑制剂对结核杆菌ICL蛋白质的抑制强度和抑制模式，并根据酶动力学参数、圆二色性试验、荧光猝灭测定及分子对接来对ICL抑制剂与ICL蛋白质之间的相互作用机制进行了初步分类。此外，经评价，先前建立的ICL抑制剂筛选模型适用于此次的高通量筛选。 研究发现，在71765种复合物中，有13种被鉴定为能够有效且稳定地抑制ICL，其中IMBI-3表现出的抑制活性最为显著，其半抑制浓度（IC50）达到30.9μmol/L，其对包含广泛耐药结核病及多重耐药结核病在内的结核杆菌的最小抑菌浓度范围为0.25-1μg/mL；当IMBI-3与异烟肼联用时，J774A.1巨噬细胞中潜在的结核杆菌的集落形成单位（CFU）数量显著下降，而IMBI-3浓度则显著上升；IMBI-3对ICL的抑制模式可能是竞争性抑制，其抑制常数Ki值约为1.85μmol/L；通过圆二色性试验及荧光猝灭测定，明确了IMBI-3与结核杆菌ICL之间的相互作用。此外，研究通过分子对接在活性位点处还鉴定出7种可能的结核杆菌ICL活性氨基酸。 综上所述，研究对以结核杆菌ICL为靶标的新型有效的抗结核药物——IMBI-3进行了鉴定和评估，发现其既能抑制体外处于对数期的结核杆菌，又能抑制巨噬细胞内处于休眠阶段的结核杆菌。研究最后还指出，IMBI-3是ICL抑制剂家族中首个同时兼备ICL酶抑制作用及抗结核活性的有代表性的化合物。
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  • 《结核杆菌借助miR-132和miR-26a减少人巨噬细胞IFN-γ应答》
    • 来源专题：结核病防治
    • 编译者：李阳
    • 发布时间：2015-05-05
    • IFN-γ活化的巨噬细胞在控制细胞内病原体方面发挥着至关重要的作用。然而，巨噬细胞也可以成为胞内病原菌结核杆菌的居住之地。已有研究表明，结核杆菌能够调节宿主miRNA的表达，基于此，来自俄亥俄州立大学的研究人员分析了结核杆菌感染的初级人巨噬细胞的miRNA表达谱，其相关成果于2014年9月24日发表在The Journal of Immunology上。 研究者们在结核杆菌感染的初级人巨噬细胞内识别出31个差异表达miRNA，并采用定量实时RT-PCR技术证实了该发现。此外，还探讨了miR-132和miR-26a（IFN-γ信号级联的组成部分之一转录共激活因子P300的负调控物）表达对结核杆菌感染的影响。 研究发现，抑制miR-132和miR-26a的表达能够提高p300蛋白水平，改善人巨噬细胞内与IFN-γ相关的转录、翻译和功能反应。 总的来说，研究数据能够证实p300是miR-132和miR-26a的一个靶标，并揭示出结核杆菌通过改变宿主miRNA表达来限制巨噬细胞对IFN-γ反应性的具体机制。
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