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《Nature | 主编辑器引导 pegRNA 反转录的结构基础》

  • 来源专题：战略生物资源
  • 编译者： 李康音
  • 发布时间：2024-05-31

  • 2024年5月29日，东京大学的研究人员在 Nature 期刊发表了题为Structural basis for pegRNA-guided reverse transcription by a prime editor的文章。

    由化脓性链球菌Cas9缺口酶（nSpCas9）和工程化的莫罗尼小鼠白血病病毒反转录酶（M-MLV RT）组成的质粒编辑器系统与质粒编辑引导RNA（pegRNA）合作，促进了活细胞中各种精确的基因组编辑。然而，由于缺乏结构信息，人们对主编辑引导的 pegRNA 反转录的分子机制仍然知之甚少。

    该研究展示了 SpCas9-M-MLV RTΔRNaseH-pegRNA-target DNA 复合物在多种状态下的冷冻电镜结构。终止结构以及我们的功能分析显示，M-MLV RT 将反转录扩展到了预期的位点之外，导致支架衍生的结合，从而在靶基因座上造成了不希望的编辑。此外，启动前、启动和延伸状态的结构比较表明，在反转录过程中，M-MLV RT 相对于 SpCas9 保持一致的位置，而 pegRNA 合成的 DNA 杂复合物则沿着 SpCas9 的表面堆积。根据该结构见解，研究人员合理地设计了 pegRNA 变体和质粒编辑器变体，其中 M-MLV RT 与 SpCas9 融合。总之，该发现从结构上揭示了质粒编辑的逐步机制，并将为开发多功能质粒编辑工具箱铺平道路。

  • 原文来源：https://www.nature.com/articles/s41586-024-07497-8
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