《伦敦帝国理工学院定量分析工具》

  • 来源专题:生物安全网络监测与评估
  • 编译者: yanyf@mail.las.ac.cn
  • 发布时间:2017-09-19
  • 马克班内特是生命科学系的定量分析实验室的实验室经理。

    我们的分析设备包括lc/ms和gc-ms平台。该设备处理范围广泛的项目,包括蛋白质和小分子。最近,我们一直在关注用于量化蛋白(“大众西部片”)的定量测量方法的方法,作为一种利用抗体来量化蛋白质的替代方法。下面列出了可用分析类型的进一步示例。定量的蛋白质组学,包括有针对性的分析和对转录修饰的定量研究分析了来自阿拉伯和其他物种的植物激素。

    植物和蚜虫的糖分析。对葡萄糖酸盐及其降解产物的分析。微生物和植物的脂肪酸分析。

    在微生物DNA / RNA氧化。细菌中循环二核的分析。对阿拉伯和其他植物的蛋白质组分析。

    他核心的lc-ms系统由两个高度灵活的ABSCIEX q圈闭LCMS设备组成。q阱是一种混合的三四倍/离子陷阱质谱仪,可以根据应用程序在不同的模式中使用。

    我们最敏感的仪器,最新的6500模型,最近被大学SIF资助;MS与一种Eksigent的微流LC系统相结合,为多肽和小分子的高通量分析提供了一个非常敏感但健壮的平台。

    一种更古老的2000q阱可以用来分析那些不需要最大灵敏度的分子,这可以连接到有价的二进制或毛细管LC系统。

    还有几个独立的LC系统,它们配备了一系列探测器(UV、RI、DAD)。

    它是如何工作的

    MS有3个四极:Q1和Q3被用作质量过滤器;Q2是一个碰撞单元,其中完整的分子和Q1的碎片被分解成小质量的碎片。

    三重四重的模式

    MRM(多个反应监测)-Q1和Q3固定:第三季度只检测一个已知的碎片(女儿),从完整的分子(母)的完整的分子(母)经过Q1。

    这是用于目标代谢和蛋白质分析的标准定量模式。

    优点:灵敏度高,重现性好,噪音低,同时测量(1000)过渡。

    缺点:只适用于已知的分子,需要标准化合物来进行充分的优化。

    前体离子扫描-第三季度固定Q1扫描

    寻找所有可能的分子,包括已知质量的共同子结构,一个例子就是寻找磷化蛋白的磷酸基,寻找磷化蛋白质,寻找磷的丢失。

    中性损失-Q1和Q3扫描,有一个固定的质量差

    寻找在一系列父母化合物中出现的常见碎片的丢失。

    离子阱模式

    增强的MS(EMS)-Q1被设置为“打开”,因此没有大规模过滤。完整的扫描光谱是由第三季度的扫描产生的。这通常用于对样品中的所有离子进行概述。

    增强型生产(EPI)-Q1被设定为固定质量(m/z值),通常是基于已知的分子。和EMS一样,光谱是在第三季度的扫描中生成的。优势是产生一个单一的父离子的全扫描光谱,例如肽序列。灵敏度可以通过MRM实现,但是EPI提供了更多的光谱信息。

    增强的分辨率(ER)-更准确的/z的决心(但是仍然不像QTOF的其他LCMS系统那样精确)。

    混合模式(四极/离子阱)是可能的。例如,这可能是与数据相关的,例如,MRM扫描的信号可以触发EPI扫描来确认复合身份。另一个例子是只选择双电荷分子来触发EPI,就像在分析胰肽片段时一样。

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