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《基于寨卡病毒NS2B蛋白特异抗原多肽的荧光素酶免疫吸附法检测寨卡病毒抗体》

  • 来源专题：重大疾病防治
  • 编译者： 张玢
  • 发布时间：2019-07-16

  • 国家重点研发计划和;国家传染病重大专项“十三五”计划项目团队建立了基于NS2B蛋白多肽抗原荧光素酶免疫吸附试验(Luciferase immunosorbent assay,LISA)的新方法,应用于检测抗ZIKV IgG抗体(anti-ZIKV IgG)。通过构建NS2B蛋白特异性多肽抗原与新型荧光素酶融合表达的载体,转染真核细胞后获得含有目标抗原与荧光素酶融合蛋白的细胞裂解物,建立anti-ZIKV IgG检测的LISA法。采用正常人血清、ZIKV感染的阳性血清、乙脑病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)感染阳性血清,登革病毒(Dengue virus,DENV)感染阳性血清,评价该方法的特异性、灵敏度与重复性及交叉反应,并与基于NS1纯化抗原的商业化ELISA试剂盒(NS1-ELISA)进行平行比较。成功建立的NS2B-LISA方法,检测灵敏度和特异度分别为92%和96.2%,通过阳性样本倍比稀释评价两种检测方法灵敏度,NS2B-LISA的灵敏度比NS1-ELISA高16倍。重复性实验显示NS2B-LISA法检测anti-ZIKV IgG板间变异系数为(3.1±0.7)%,板内变异系数为(2.6±0.9)%。本研究基于NS2B蛋白多肽抗原成功建立了anti-ZIKV IgG检测的LISA新方法,该方法简便、特异、灵敏、重复性好,易于高通量自动化,可用于anti-ZIKV IgG感染的免疫学诊断与流行病学研究。

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    • 非处方的新冠测试可以快速显示你是否感染了SARS-CoV-2。但是如果你的测试结果是阳性的，没有类似的家用测试来评估你能在多长时间内避免再次感染。在一项新的研究中，来自美国约翰霍普金斯大学和拉根研究所的研究人员报告了一种简单、准确的基于葡萄糖仪的测试方法，它涉及一种新型融合蛋白。他们说，消费者有朝一日可能能够使用这种测试方法来监测他们自己的SARS-CoV-2抗体水平。相关研究结果于2022年6月8日在线发表在Journal of the American Chemical Society期刊上，论文标题为“Antibody–Invertase Fusion Protein Enables Quantitative Detection of SARS-CoV-2 Antibodies Using Widely Available Glucometers”。 针对SARS-CoV-2的疫苗和感染这种病毒本身可以在一段时间内预防未来的感染，但目前还不清楚这种保护到底能持续多久。免疫保护的一种很好的指标是一个人的SARS-CoV-2抗体水平，但是作为金标准的测量方法，酶联免疫吸附法（ELISA）需要昂贵的设备和专业技术人员。 血糖仪是现成的，易于使用，并可与远程临床服务相结合。科学家们一直在对这些设备进行改造，将检测与葡萄糖的产生结合起来，用于检测其他目标分子。例如，如果这种测试方法所用的检测抗体与患者血液中的抗体结合，那么就会发生反应，产生葡萄糖---这是血糖仪可以很好检测到的。 转化酶（invertase）对于这种类型的分析来说是一种有吸引力的酶，因为它能将蔗糖转化为葡萄糖，但很难用化学方法将这种酶附着在检测抗体上。 基于此，约翰霍普金斯大学的Netzahualcóyotl Arroyo-Currás、Jamie B. Spangler及其同事们想看看产生一种由转化酶和检测抗体组成的融合蛋白是否能够发挥作用，使SARS-CoV-2抗体水平能用血糖仪读取。 这些作者设计并产生了一种新型的融合蛋白，这种融合蛋白含有转化酶和一种与人类免疫球蛋白（IgG）抗体结合的小鼠抗体（即小鼠抗人IgG抗体）。他们发现，该融合蛋白与抗人类IgG结合，并成功地让蔗糖产生葡萄糖。 接下来，他们制作了带有SARS-CoV-2刺突蛋白的测试条。当浸泡在COVID-19患者的样本中时，患者的SARS-CoV-2抗体与SARS-CoV-2刺突蛋白结合。加入这种转化酶/抗人IgG融合蛋白，然后加入蔗糖，就会产生葡萄糖，所产生的葡萄糖可以用血糖仪检测。 他们通过用血糖仪对多名患者的样本进行分析来验证这种测试方法，发现这种新的测定方法与四种不同的ELISA一样好用。他们说，该方法也可仅改进后测试SARS-CoV-2变体和其他传染病。 参考资料： Elissa K. Leonard et al. Antibody–Invertase Fusion Protein Enables Quantitative Detection of SARS-CoV-2 Antibodies Using Widely Available Glucometers. Journal of the American Chemical Society, 2022, doi:10.1021/jacs.2c02537.
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