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《基于PCR测序技术的HBV感染者耐药突变临床分析》

  • 来源专题：病毒性肝炎防治
  • 编译者： 肖宇锋
  • 发布时间：2016-03-08

  • 摘要：目的 用PCR测序技术分析HBV感染者接受核苷(酸)类似物治疗过程中出现的耐药突变以及HBV基因型.方法 收集2013年6月至2014年5月入院治疗的317例慢性HBV感染者,所有患者均使用核苷(酸)类似物进行抗病毒治疗至少3个月.采用PCR直接测序法检测耐药突变位点.组间数据比较采用t检验、x2检验或者U检验. 结果 317例HBV感染者中,119例发生了耐药突变,每种核苷(酸)类似物都有主要的耐药突变类型:拉米夫定的主要耐药突变类型是rtM204I+rtL 180M±rtL80I(30.9％);阿德福韦的主要耐药突变类型是rtA181T/N(21.3％)、rtS213T/N(21.3％)和rtV214A (21.3％);恩替卡韦的主要耐药突变类型是rtL180M(48％);rtM204I是替比夫定的主要耐药突变类型;rtA194T是替诺福韦的主要耐药突变类型.不同HBV基因型耐药突变发生率的差异无统计学意义(x2=1.11,P＞0.05).2例替诺福韦预存耐药突变rtA 194T被检出.结论 本研究基于PCR测序技术成功分析HBV感染者核苷(酸)类似物耐药突变情况以及HBV基因型的分布,为临床合理用药提供了参考.

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    • 编译者：李越
    • 发布时间：2013-05-28
    • 目的研究经输血感染的HIV-1遗传基因突变特征,分析其对抗HIV药物的耐药性。方法经输血感染HIV-1的患者37例,从血浆提取HIV-1 RNA,运用RT-PCR和巢式聚合酶链反应(nested-PCR)扩增HIV-1 pol区基因片段,并对电泳阳性的目的片段进行测序,将结果提交到http://HIVdb.stanford.edu,分析HIV-1的耐药突变情况。结果 37例患者中共20例发生耐药突变,其中19例为病毒学或免疫学失败。3例患者在治疗过程中发生了蛋白酶抑制剂(PIs)位点突变,主要位点突变为V32AV,但未引发PIs耐药。有23例患者发生了反转录酶编码区基因突变,包括M184V、TAMs、Q151M复合体、K103N、Y181C等,其中20例HIV-1遗传基因的突变不同程度地导致了反转录酶抑制剂(RTIs)耐药,发生率为54.1%(20/37)。结论经血液感染HIV-1患者在参加抗病毒治疗后耐药发生率较高,应适时进行耐药监测,及时更新治疗方案。 更多还原
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    • PCR-反向点杂交技术是一种将PCR技术的高敏感度、反向斑点杂交技术的高特异性和膜芯片技术的高通量3种优势有效结合起来的快速基因诊断手段，可同时检测4种一线抗结核药物5个常见耐药相关基因上13个位点的突变，简便快速，且可直接采用痰标本进行检测，8小时即可得出结果。基于此，来自江西省胸科医院的研究人员以该院肺结核住院患者痰标本为分析样本，借助PCR-反向点杂交技术对一线抗结核药物（异烟肼、利福平、链霉素及乙胺丁醇）5个常见耐药突变基因上的13个位点进行了检测，用于了解基因突变发生频率及分布特点，并以药敏试验为金标准进行比较，分析其敏感度、特异度、符合率、阳性预测值及阴性预测值等指标，旨在评价其在结核分枝杆菌快速耐药检测中的应用价值，其相关成果发表于《中国防痨杂志》2016年第38卷第8期。 研究共纳入经病原学或病理学证实或符合菌阴肺结核诊断标准的1071例肺结核住院患者（男723例、女348例），且均送检了痰液标本。采用PCR-反向点杂交技术对上述痰标本进行异烟肼（H）、利福平（R）、链霉素（S）及乙胺丁醇（E）耐药基因检测，并以基于痰培养（改良罗氏培养）阳性标本的比例法药敏试验检测结果为金标准来验证基因检测结果的可靠性，进而评价其检测效能。 PCR-反向点杂交检测结果显示，596例结核杆菌阳性（阳性率为55.65％），其中218例（36.58％）检出H、R、S、E耐药基因突变，分布于所测13个位点。此外，根据药物突变位点检出例次占该药物基因突变总检出例次的构成比，发现H、R、S、E最常见突变位点分别位于KatG的315M（82.53％，137/166）、rpoB的S531L（69.50％，98/141）、rpsl的43M（78.65％，70/89）以及embB的306M2（55.13％，43/78）和306M1（39.74％，31/78）。 此外，433例患者标本同时行结核杆菌培养，发现157例培养及PCR-反向点杂交检测均为阳性，其中药敏试验结果显示耐药者74例，H、R、S、E分别耐药45、59、37及19例。以培养及药敏试验结果为金标准，PCR-反向点杂交法对H、R、S、E的耐药检测经Kappa检验具有较好一致性（Kappa值分别为0.77、0.73、0.66、0.49），其中反向点杂交法的敏感度分别为88.89％（40/45)、79.66％（47/59）、67.57％（25/37）、63.16％（12/19）；特异度分别为91.07％（102/112）、91.84％（90/98）、95.00％（114/120）、91.30％（126/138）。 综上所述，PCR-反向点杂交技术用于结核杆菌耐药基因检测具有快速、可靠的优点，对早期临床用药具有指导作用，但限于检测基因的不足，使得诊断敏感度不够高，因而后续还需纳入更多突变基因来开展相关的试验研究。
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