《NK细胞活性的免疫调节。》

  • 来源专题:实验室生物安全
  • 编译者: 苑晓梅
  • 发布时间:2019-11-30
  • 天然杀伤(NK)细胞可以杀死病毒感染的细胞和肿瘤细胞,而无需事先致敏,并且可以分泌多种调节免疫系统不同细胞活性的细胞因子和趋化因子。 靶细胞的识别由种系编码的受体介导,并且NK细胞的活性可以由可溶性因子(例如细胞因子和Toll样受体配体)进一步调节。 因此,NK细胞显示出令人振奋的潜力,可作为对抗恶性疾病的强大免疫治疗工具,并且正在测试旨在克服肿瘤诱导的NK细胞抑制作用并恢复NK细胞介导的抗肿瘤活性的不同策略。 本节介绍了基于流式细胞术的不同方案,以研究NK细胞效应子功能,这些功能可用于评估不同治疗化合物的免疫调节能力。

  • 原文来源:https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/31776924
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    • 从头孢菌的正丁醇提取物中分离出四种新的三萜皂苷,即草莓苷A-D(1-4)和六种已知的皂苷。除此之外,碱性水解后还获得了三种新的次皂苷元(2a-4a)。通过1D、2D NMR、HR-ESI/MS和GC-MS分析对分离化合物的结构进行解析。采用MTT法考察A549、CCD34-Lu、MDA-MB-231、PC-3、U-87MG、HeLa、HepG-2细胞的细胞毒活性。此外,还以 M1 或 M2 的形式评估了化合物在有/没有灭活 IBV D274 抗原处理的情况下巨噬细胞极化对 THP-1 细胞起源的巨噬细胞的免疫调节作用。细胞毒性结果显示,化合物1和促apogenin 2a的细胞毒性较阿霉素明显。结果表明,经皂苷分子处理的THP-1源性巨噬细胞可诱导M1和M2极化。此外,未经IBV D274抗原含皂苷化合物处理的巨噬细胞相对于M1显著触发M2极化。值得注意的是,与双桥苷(2-4)相比,单桥苷皂苷(1和2a-4a)对M2极化的影响最大。综上所述,所有分离出的新皂苷元及其原皂苷元均对巨噬细胞具有免疫调节潜力,可增加免疫应答,对THP-1来源的巨噬细胞无显著的细胞毒性作用。
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    • 首先作者对3例中度COVID-19患者(M1-M3)、6例严重/危重COVID-19患者(S1-S6)、3例健康对照者(HC1-HC3)和1例公开的BALF(HC4)样本的BALF细胞进行了单细胞RNA测序(scRNA-seq)。通过聚类分析发现31个细胞亚群,包括巨噬细胞(CD68)、中性粒细胞(FCGR3B)、髓系树突状细胞(mDCs) (CD1C, CLEC9A)、浆细胞样树突状细胞(pDCs) (LILRA4)、NK细胞(KLRD1)、T细胞(CD3D)、B细胞(MS4A1)、浆细胞(IGHG4)和上皮细胞(TPPP3, KRT18)等细胞亚群,主要的细胞类型位为mDCs、pDCs、肥大细胞、NK细胞、T细胞和B细胞,每组中巨噬细胞均出现特异性性富集。重症COVID-19患者BALFs中巨噬细胞和中性粒细胞比例高于中度感染患者,而mDCs、pDCs和T细胞比例较低。 为了进一步分析巨噬细胞的异质性,对巨噬细胞进行了重新聚类。根据FCN1、SPP1和FABP4表达对巨噬细胞分为FCN1hi、FCN1loSPP1+、SPP1+和FABP4+四组。不同严重程度患者的巨噬细胞中FCN1、SPP1和FABP4的组成和表达均有较大差异,对照组和中度患者均高表达FABP4,而重症患者均高表达FCN1和SPP1。接下来,对不同巨噬细胞组进行DEG分析、GO分析和GSEA分析发现,第1组表达外周血单核细胞样标志物S100A8、FCN1、CD14,第2组表达高水平的趋化因子CCL2、CCL3、CXCL10等,1和2组基因表达提示为经典M1巨噬细胞;第3组表达了免疫调节基因A2M、GPR183和CCL13,以及促纤维化基因TREM2、TGFB1和SPP1,提示存在M2样巨噬细胞;第4组表达肺泡巨噬细胞AM基因FABP4、APOC1、MARCO和脂质代谢功能相关的基因。 接下来分析了T淋巴细胞和NK淋巴细胞亚群,结果发现重症患者中CD8+ T细胞比例较中度患者低,而增殖T细胞比例较高。随后通过单细胞T细胞受体测序(scTCR-seq)进一步分析T细胞克隆扩增,中度和重症患者CD8+ T细胞克隆扩增的细胞数量不同,中度患者的ZNF683+ CD8+ T细胞50%以上属于扩增克隆,与严重/危重感染的患者相比扩增指数较高。而重症患者BALFs中的CD8+ T细胞扩增较少,增殖较多,且存在更多表型上的差异;而中度患者的BALFs中,CD8+ T细胞效应因子比例更大,具有组织驻留和高度扩增的特征。 最后,作者检测了COVID-19患者BALF中的细胞因子和趋化因子的表达。重症患者的BALFs中有更高水平的炎性细胞因子,尤其是IL-8、IL-6和IL-1β,在scRNA-seq数据中,重症COVID-19患者的肺巨噬细胞中IL1β、IL6、TNF和各种趋化因子(CCL2、CCL3、CCL4和CCL7)表达水平较高,而中度COVID-19组中CXCL9、CXCL10和CXCL11水平均高于健康人群,CXCL16表达水平明显高于重症患者,而CXCL16产物能够于CXCR6结合,因此提示重症COVID-19感染患者的肺巨噬细胞可能通过CCR1和CXCR2募集炎性单核细胞细胞和中性粒细胞,从而促进局部炎症,而中度COVID-19感染患者的巨噬细胞通过参与CXCR3和CXCR6产生更多T细胞的趋化因子。