CRISPRCas9系统在模式昆虫中的应用促进了功能基因组学的研究。然而,该系统尚未应用于许多害虫。在这里,我们报道了在全球农业害虫——草地贪夜蛾(FAW,Spodoptera frugiperda)中建立多个转基因crisprcas9基因组编辑方法。为了鉴定适合筛选转基因FAW的荧光蛋白,在不同启动子的控制下,制备并评价了9个表达荧光蛋白编码基因的转基因株系。发现hr5ie1启动子驱动的增强绿色荧光蛋白和红色荧光蛋白tdTomato基因适合于转基因FAW的鉴定。制备了多株表达Cas9的转基因FAW株系,在这些株系的胚胎中微量注射sgrna未能诱导靶基因敲除。为了克服这一问题,我们使用U6-sgRNA和U6-tRNA-sgRNA系统在FAW中表达sgrna,发现U6-tRNA-sgRNA系统比U6-sgRNA系统更有效。将Cas9和sgRNA在同一转基因动物或两个单独的菌株中表达,然后将它们杂交,将Cas9和sgRNA结合在一起,可以有效地敲除靶基因。基于crisprcas9的多种转基因基因组编辑方法为这种全球性害虫和其他鳞翅目害虫的基因编辑和功能基因组学研究提供了宝贵的工具。