《实时荧光定量核酸扩增检测技术(Xpert Mtb/RIF,简称"Xpert")和GenoType? MTBDRplus线性探针检测技术(简称"MTBDR")用于快速诊断骨关节结核及其耐药性的比较研究》

  • 来源专题:结核病防治
  • 编译者: 李阳
  • 发布时间:2016-05-30
  • 在MDR-TB高负担国家中,快速诊断骨关节结核及其耐药性对骨关节结核病的早期诊断和治疗以及对结核病疫情的控制均具有重要意义。一些Meta分析显示,分子诊断技术在肺外结核病的诊断中具有较高的敏感度和特异度,然而当前国内外尚未有对Xpert和MTBDR在骨关节结核早期诊断中的价值进行评价的相关研究。基于此,来自河南省胸科医院以及首都医科大学附属北京胸科医院的研究人员以临床诊断参考标准(CRS)和绝对浓度法药物敏感性试验(简称“药敏试验”)为金标准,评价了Xpert和MTBDR在快速诊断骨关节结核及其耐药性方面的临床应用价值,其相关成果发表于《中国防痨杂志》2015年第37卷第11期。

    研究首先选取2014年3月至6月北京胸科医院收治的60例疑似骨关节结核患者,并对其实施灶清除手术,术中所取病灶中的脓液标本至少为5ml;然后对每份标本行涂片抗酸杆菌检查、MGIT960分枝杆菌培养、Xpert及MTBDR检测,其中培养阳性的结核杆菌行药敏试验(DST)检测;最后以CRS为金标准计算Xpert和MTBDR检测脓标本中结核分枝杆菌的敏感度和特异度,以DST为金标准计算Xpert和MTBDR检测脓中结核分枝杆菌耐药性的敏感度和特异度。

    结果显示,以CRS为金标准,涂片、培养、Xpert和MTBDR的敏感度分别为26.00%(13/50)、48.00%(24/50)、82.00%(41/50)和72.00%(36/50),而10例非结核病患者脓标本4种技术检测结果均为阴性,即特异度均为100%(10/10);Xpert和MTBDR对确诊骨关节结核患者检测的敏感度分别为100%(24/24)和87.50%(21/24),对临床诊断骨关节结核患者检测的敏感度分别为72.73%(16/22)和63.64%(14/22)。此外,二者对4例疑似骨关节结核患者均检测出1例;以DST为金标准,6例RFP耐药样本中,Xpert检测RFP耐药全部阳性,MTBDR检测5例RFP耐药阳性,而18例RFP敏感样本中2种技术检测结果均为阴性。7例INH耐药样本中,MTBDR检测6例INH耐药阳性,而17例INH敏感样本中MTBDR技术检测结果均为阴性。

    综上所述,Xpert和MTBDR检测脓标本中结核杆菌的敏感度和特异度均较高,检测时间短,且可同时检测其耐药性,若能用于临床诊断骨关节结核标本的检测,则能够促进骨关节结核的早期诊断和治疗,不仅可控制病情进展、缩短治疗疗程,还可减轻患者经济压力、减少或避免其肢体功能障碍。

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    • 来源专题:结核病防治
    • 编译者:李阳
    • 发布时间:2016-10-12
    • 结核病的诊断主要依靠痰涂片抗酸染色和结核杆菌(Mtb)培养,但痰涂片敏感度较低而Mtb培养和药敏试验耗时较长,且易延误诊断或漏诊。随着分子生物学诊断技术的不断发展,利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(Xpert Mtb/RIF)可以在2 h内直接从临床样品中检测到结核杆菌复合物(MTBC)与利福平(RIF)耐药性,在多个国家的评估性研究中显示出高度敏感性和特异性,并得到WHO的认可和推荐。基于此,来自浙江省衢州市人民医院的6名研究人员通过对2014年10月至2015年3月在该院就诊的疑似肺结核患者进行连续6个月监测,并对痰液样本同时进行抗酸染色镜检、液体MGIT培养和Xpert Mtb/RIF检测,评估了Xpert MTB/RIF在检测Mtb及其利福平耐药性中的应用效果,其相关成果发表于《中华临床感染病杂志》2016年第9卷第1期。 研究初期纳入疑似肺结核患者共713例,后因各种原因(Xpert MTB/RIF检测失败8例、液体培养污染39例、重复患者12例、诊断不明确2例)有61例患者未得到完整实验结果,故实际纳入统计分析的患者例数为652例。 结果显示: 1. 参照肺结核诊断标准(WS288-008)、临床表现、胸部影像学及实验室检查,399例确诊为肺结核(男性274例,女性125例,平均年龄为57.1岁)、11例非结核分枝杆菌、242例无结核;Xpert MTB/RIF检测阳性151例,其中诊断为肺结核149例、肺癌1例、肺部感染1例;Xpert MTB/RIF、痰涂片镜检和MGIT培养检测结核分枝杆菌的敏感度和特异度分别为37.3%(149/399)和99.2%(251/253)、17.0%(68/399)和98.8%(250/253)、37.8%(151/399)和95.6%(242/253)。其中,Xpert MTB/RIF检测的敏感度显著高于涂片镜检(χ2=50.9,P<0.01),但与MGIT培养相比,差异无统计学意义(χ2=0.5,P>0.05)。而三种方法的特异度比较,差异无统计学意义(P>0.05); 2. 按涂片镜检和培养结果进行分类,Xpert MTB/RIF检测的敏感度分别为98.6%(68/69)(涂阳培阳)、87.9%(73/83)(涂阴培阳)和3.2%%(8/247)(涂阴培阴)。此外,8份Xpert MTB/RIF检测阳性但培养和涂片均为阴性样本的平均ct值为28.1; 3. 对Xpert MTB/RIF检测和MGIT培养均为阳性的141例进行利福平耐药性检测,其中Xpert MTB/RIF检出利福平耐药12例。以液体药敏法为金标准,Xpert MTB/RIF检测利福平耐药敏感性为100%(9/9)、特异性为97.3%(129/132)。 综上所述,Xpert MTB/RIF检测痰液中结核分枝杆菌具有较高的敏感性和特异性,操作简单,生物危害度小,虽然在检测利福平耐药性方面与参考方法存在一定差异,但其2h就可预测利福平耐药性的特点,相对于需要漫长时间等待Mtb培养和药敏结果来说,对于临床快速诊断和治疗肺结核具有重要意义。
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    • 编译者:李阳
    • 发布时间:2016-03-24
    • 胸膜结核是仅次于淋巴结结核的第2种常见肺外结核,目前对胸膜结核的诊断主要依赖于胸膜活检标本和(或)胸腔积液标本的传统病原微生物检测,包括胸腔积液理化检测、抗酸染色、培养鉴定、聚合酶链反应以及病理组织学检查等,然而这些诊断鉴定方法的敏感度及特异度较低且耗时耗力。而新型分子检测法核酸扩增(Xpert MTB/RIF)技术以全自动半巢式实时PCR技术为基础,以rpoB基因为靶基因可在2小时内同时检测MTB和利福平耐药,目前在肺结核诊断领域应用较为广泛,且其对肺结核的诊断价值也已逐步得到证实,因此进一步探讨其用于肺外结核诊断的可行性是很有必要的。为此,来自天津中医药大学第一附属医院及南昌大学第一附属医院的研究人员采用Xpert MTB/RIF检测了痰标本抗酸染色阴性可疑胸膜结核患者的胸膜活检组织及胸腔积液标本中的MTB并分析了利福平耐药情况,评价其在胸膜结核快速诊断中的应用价值,其相关成果发表于《中华结核和呼吸杂志》2015年第38卷第10期。 研究人员以香港大学深圳医院、南昌大学第一附属医院、江西省胸科医院及南昌大学第二附属医院2011年1月至2012年11月收治的126例胸膜结核临床疑似患者的胸膜活检组织及胸腔积液标本为样本,分别采用抗酸染色法、罗氏培养基培养法、全自动快速分枝杆菌培养鉴定药敏仪(BACTEC MGIT 960系统)培养法及Xpert MTB/RIF对其进行检测和对比分析,并采用SPSS 17.0对结果进行统计分析,以敏感度、特异度、阳性预测值及阴性预测值作为诊断性能的评价指标。 研究发现以胸膜活检组织标本的传统分离培养结果(55例标本确诊为分枝杆菌阳性,71例确诊为阴性)为金标准,Xpert MTB/RIF法以胸膜活检组织作为标本的敏感度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为85.5%(47/55)、97.2%(69/71)、95.9%(47/49)和89.6%(69/77),以胸腔积液作为标本的敏感度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为43.6%(24/55)、98.6%(70/71)、96.0%(24/25)和69.3%(70/101);以BACTEC MGIT 960系统的药敏试验结果为参考标准,Xpert MTB/RIF法检测利福平药敏试验的利福平耐药率及敏感符合率分别为90.9%(9/10)和93.9%(31/33)。结合测序药敏结果,利福平耐药率及敏感符合率分别为90.9%(10/11)和96.9%(31/32)。 综上所述,Xpert MTB/RIF法与传统病原学检测方法相比具有敏感度及特异度高、检出时间短的优势,适用于对痰标本抗酸染色阴性的可疑胸膜结核患者胸膜结核的临床快速诊断,且胸膜活检组织标本较胸腔积液标本更适合Xpert MTB/RIF法对胸膜结核的准确特异快速诊断。