《噬菌体协助细菌帝国之间建立“界限”》

  • 来源专题:中国科学院文献情报系统—海洋科技情报网
  • 编译者: liguiju
  • 发布时间:2019-05-31
  • 细菌是“高情商”的生物,懂得“社交”。他们以团结协作的群体形式生活在自然环境中,以抵抗来自外界环境的压力。同一细菌群体中还存在自我识别能力,可以区分哪些是同一家族,同时共同抵抗“异族”。具有扩散能力的化学信号分子和细菌的表面受体可作为细菌群体识别的语言和工具。

      噬菌体是地球上数量最多的一种细菌病毒。噬菌体的生存依附于细菌,但它的繁殖和扩散又依赖于细菌的死亡。噬菌体与细菌永不停息的相爱相杀共同谱写了生物进化的篇章,而广泛使用的限制性内切酶和CRISPR系统是二者相爱相杀的最好证据。

      日前,中国科学院南海海洋所的王晓雪课题组和宾夕法尼亚州立大学的Thomas Wood 课题组在4月16日的Cell Reports杂志上报道了细菌游动过程中使用感染它们的病毒 (即噬菌体)进行自我识别的新方式。这是细胞使用病毒将自己与近源的竞争对手区分开来的第一个证据。

      研究的想法开始于王晓雪等准备运动平板,科研人员发现当把不同大肠杆菌 K-12 BW25113菌株接种在同一运动平板上时,经过一段时间,菌株在相遇的区域建立起一道“防御线”,形成了一道类似于“国界”的分界线。

      为了揭示分界线形成的机制,科研人员对已有的大肠杆菌 K-12 突变文库的4296个单基因敲除的菌株进行筛选。幸运的是,他们发现当细菌中携带的突变影响到噬菌体复制所需的基因,分界就完全消失了。研究人员推测,“分界线”可能是通过烈性噬菌体引起的细胞裂解形成的。

      对边界线处的群体进行研究发现,在长期的进化过程,一个类似于T1的噬菌体(重新命名为SW1)被细菌捕获,将其基因组整合到了细菌基因组上。在运动平板上,当携带SW1噬菌体的大肠杆菌与不携带SW1噬菌体的大肠杆菌相遇时,一部分细菌中SW1噬菌体会重新被激活,重新释放到环境中,去攻击不带有此噬菌体的细胞(外族,没有标记“SW1”)并杀死这些细胞,从而在“交战区”形成了没有活细菌而存在大量活跃的SW1的透明区,也就是平板上看到的分界线(demarcation line)(图2A)。

      分界线一旦形成,界内的细菌可以在这道屏障的保护下进行繁殖和搜寻营养物质,互不干扰。而携带有SW1噬菌体的细菌可以帮助细菌抵御其它噬菌体的入侵(图2B),并在特定的情况下提供争夺营养的优势条件。

      利用王晓雪等前期构建的大肠杆菌K-12中9个隐匿型噬菌体的缺失突变株(Wang et al., 2010 Nature Communications)进行检测时,研究人员发现其中1个古老的隐匿型噬菌体CPS-53携带的YfdM蛋白,是负责细菌自我识别的关键蛋白。他们发现,将携带SW1的细菌细胞暴露在 YfdM 中,会刺激噬菌体颗粒的产生,并导致缺乏 SW1细胞的裂解。相反的,较高浓度的 YfdM 或噬菌体颗粒会在细菌细胞之间产生更为明显的分界线(图2C)。

      研究结果表明,SW1 通过使用宿主中的CPS-53神秘防御蛋白YfdM 进行控制“分界线”的形成。而神秘的防御蛋白来自于一个更加古老的噬菌体。

      这种新的自我识别机制允许细菌群体与“亲属”进行交流,同时对抗“外族”,这种交流在对营养需求、毒力表达、密度感应和生物膜形成中可能非常重要。细菌能够通过化学信号的交流将自己与其他细菌区分开来,这项新的研究展示了细胞利用病毒来区分自己和周围环境中密切相关的细菌。因此,应该重新评估病毒与其细胞宿主之间的关系,因为病毒感染可能在某些竞争条件下对宿主更为有利。

      在未来的研究中,研究人员计划研究SW1如何避免攻击其宿主细胞,而不杀死缺乏病毒的细菌。由于人和动物肠道中定殖的细菌多可在肠道表明游动,为了获得更多的生存空间,它们将自己携带的噬菌体作为武器,攻击其它近源细菌,系统的研究将有助于了解细胞如何竞争或许可以更好地利用病毒来对抗细菌感染,对肠道致病菌的治疗具有一定的参考价值。

      论文题目Phages Mediate Bacterial Self-Recognition。文章链接:https://www.cell.com/cell-reports/fulltext/S2211-1247(19)30400-0。

  • 原文来源:http://www.scsio.ac.cn/xwzx/kydt/201905/t20190527_5302479.html
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    • 编译者:hujm
    • 发布时间:2023-10-23
    • 一项微观上的发现不仅能让科学家们了解我们周围的微生物世界,还能提供一种控制CRISPR-Cas生物技术的新方法。在一项新的研究中,新西兰奥塔哥大学的Peter Fineran教授和丹麦哥本哈根大学的Rafael Pinilla-Redondo博士领导的一个国际研究团队揭示了细菌病毒---也称为噬菌体---抑制细菌 CRISPR-Cas 免疫系统的一种新方法。相关研究结果于2023年10月18日在线发表在Nature期刊上,论文标题为“Bacteriophages suppress CRISPR–Cas immunity using RNA-based anti-CRISPRs”。 论文共同第一作者、奥塔哥大学微生物学与免疫学系噬菌体-宿主相互作用实验室的David Mayo-Muñoz博士说,这一发现可能让我们了解环境中的微生物动态、使基因编辑更安全,并带来更有效的抗生素替代品。他说,“这一发现令科学界兴奋不已,因为它让我们对如何阻止CRISPR-Cas防御有了更深入的了解。” CRISPR-Cas是细菌拥有的能够保护它们不受噬菌体感染的免疫系统。它的工作原理是将噬菌体的DNA片段添加到细菌的基因组中。细菌最终会有一个记忆库,里面储存着过去感染噬菌体的经历,它会把这些经历像人脸照片一样归档,在噬菌体再次攻击时,利用它们来识别和降解特定的噬菌体。 “如果有噬菌体入侵,它的部分 DNA 会被添加到记忆库中,然后在这个过程中将 DNA 转化为 RNA。每条 RNA 就像一个向导,这样 CRISPR-Cas 系统就能正确识别并消灭入侵的噬菌体。记忆库中的每一个添加的DNA片段都被CRISPR重复序列分割开来,这些重复序列就像书挡一样堆叠在相邻的噬菌体序列之间。有趣的是,噬菌体进化出了不同的方法来克服这些防御系统---这就像是一场进化军备竞赛。细菌拥有CRISPR-Cas,因此噬菌体开发出了抗CRISPR,这使它们能够阻断细菌的这些免疫复合物。” Mayo-Muñoz说,“我们发现了噬菌体阻止CRISPR-Cas系统的全新方法。” 之前的科学家们已发现,一些噬菌体的基因组中含有CRISPR重复序列,而在这项新的研究中,这些作者证实噬菌体会给细菌加载这些RNA重复序列,从而阻止CRISPR-Cas。 Fineran教授说,这些抗CRISPR RNA会使细菌的CRISPR-Cas免疫复合物失明。他说,“噬菌体的基因组中含有细菌CRISPR-Cas系统的成分。它们利用这些分子模拟物来抑制细菌的免疫系统,使噬菌体得以复制。” 这些作者还发现当噬菌体将 RNA 重复序列加载到 CRISPR-Cas 蛋白上时,并非所有正确的蛋白都会被加载,从而形成无功能的免疫复合物。“这种分子模拟物破坏了细菌的防御能力和CRISPR-Cas系统的功能;它基本上就是一个诱饵。” 人们对CRISPR-Cas的一大兴趣在于它经编程后能够精确地编辑基因组的特性。有趣的是,抗CRISPR可用作关闭或调整这项技术的安全开关。“要想发挥CRISPR-Cas技术的潜力,重要的是能够控制它、开启和关闭它以及调整它,从而提高其准确性和治疗效果。” Mayo-Muñoz博士说,“我们的发现首次证明了抗CRISPR RNA的存在,与之前发现的抗CRISPR蛋白相比,抗CRISPR RNA的遗传序列更短,而且由于它们是基于已知的CRISPR重复序列,我们有可能为所有CRISPR-Cas系统及其特定应用设计抗CRISPR RNA。” CRISPR-Cas最终将用于基因疗法---修复导致疾病的突变基因,但为了使它更安全,需要抗CRISPR来调节这种技术。 噬菌体还可以作为抗菌剂杀死病原菌,提供抗生素的替代品,但如果受感染的细菌具有活跃的CRISPR-Cas系统,就需要使用含有合适的抗CRISPR的噬菌体来中和它。 Fineran教授说,“能够构建定制的抗CRISPR将是工具箱中的一个强大选择。我们很高兴能够对噬菌体如何与细菌宿主作战提供全新的见解。我们希望这些 RNA anti-CRISPR RNA能够提供一种新的方法来协助控制 CRISPR-Cas 技术。” 参考资料: 1. Sarah Camara-Wilpert et al. Bacteriophages suppress CRISPR–Cas immunity through RNA-based anti-CRISPRs. Nature, 2023, doi:10.1038/s41586-023-06612-5. 2. Scientists uncover new way viruses fight back against bacteria https://phys.org/news/2023-10-scientists-uncover-viruses-bacteria.html
  • 《噬菌体疗法:精准打击土传病原菌》

    • 来源专题:生物安全知识资源中心—领域情报网
    • 编译者:hujm
    • 发布时间:2023-02-09
    •  利用噬菌体阻控病原细菌的手段被称为“噬菌体疗法”,这是一种有望替代抗生素的绿色生态技术。目前,国内已有研究单位针对不同的植物病害收集了大量的噬菌体资源,研究不同噬菌体的作用机制,以及噬菌体之间的相互影响,利用不同噬菌体联合抑制土壤病原细菌。   噬菌体,是专门“吃”细菌的一类病毒,它们广泛存在于海洋和陆地自然生态系统中。噬菌体通过侵染宿主细菌,可以调控细菌种群数量,驱动细菌群落多样性和组成的变化,进而影响生态系统功能。   但长久以来,土壤中的噬菌体与作物土传病害的关系还鲜有研究。   近日,国际学术期刊《微生物组》在线发表了中国工程院院士、南京农业大学资源与环境科学学院教授沈其荣团队的最新研究论文。该团队研究发现,土传青枯病的发生,与作物根际噬菌体群落构成及噬菌体—宿主细菌的互作特征密切相关。该研究首次证明特异性侵染土著细菌的噬菌体,对土传病原细菌青枯菌入侵的潜在影响,为利用噬菌体消减青枯菌导致的作物土传青枯病提供了新的理论基础。   靶向消灭病原细菌,对环境更友好   在农业生产中,化学农药和抗生素已被广泛使用,但不合理的使用会造成土壤功能退化、环境污染等问题。   “例如,化学农药的滥用会显著增加病原细菌的耐药性和抗性基因的风险传播。此外,在病原细菌与其宿主植物互作的热点区还存在大量土著微生物,这些微生物通过复杂的协同互作,在抵御病原细菌侵入和感染宿主植物中发挥重要作用。然而,广谱杀菌的抗生素和化学农药等在抑制病原细菌的同时,也会破坏土壤中土著微生物群落的结构和功能稳定。”沈其荣介绍,要护卫土壤、动植物、环境健康,亟须有效靶向消灭土传病原细菌并对环境友好的新措施。   噬菌体,便是其中的“天选之子”。噬菌体是专门侵染细菌的一类病毒,在环境中普遍存在,“目前地球生物圈中噬菌体的数量高达10^31个。利用噬菌体阻控病原细菌的手段被称为‘噬菌体疗法’,这是一种有望替代抗生素的绿色生态技术。”论文共同通讯作者、南京农业大学教授韦中告诉科技日报记者。   目前,噬菌体疗法已广泛应用于临床医疗、畜牧业、水产养殖和种植业等领域。   韦中介绍,噬菌体疗法具有几大优势:噬菌体可以识别特定病原细菌,对环境影响小;噬菌体可以利用宿主进行增殖,并进入细菌体内,高效裂解病原细菌;噬菌体疗法的应用可以减少抗生素的使用,为食品安全提供保障。   打造噬菌体“鸡尾酒”,守护植物健康   “在抗生素普及前,噬菌体疗法已经有了应用。”韦中所言非虚。自噬菌体被发现以来,噬菌体疗法不断发展,在解决由病原细菌侵染引起的作物健康问题方面已有不少尝试。   1924年,研究人员发现白菜滤液中的噬菌体类物质能够防止由黄单胞菌引起的白菜腐烂。随后, 该物质又被广泛应用于防治由青枯菌、欧文氏菌、丁香假单胞菌和野油菜黄单胞菌等引起的茄科作物青枯病、猕猴桃细菌性溃疡病、果树火疫病、柑橘斑点病、水稻叶枯病以及土豆洋葱软腐病和黑胫病等。2005年,美国环境保护局首次批准了防治由野油菜黄单胞菌和丁香假单胞菌引起的番茄和辣椒的细菌斑点病的噬菌体产品。2011年,美国环境保护局批准一家公司生产的噬菌体生物农药用于防治番茄的溃疡病。   目前,国内已有研究单位针对不同的植物病害收集了大量的噬菌体资源,这些噬菌体为有效防控病害提供了资源保障。   沈其荣研究团队将目标对准青枯菌。青枯菌在土壤中可通过侵染作物根部,引起烟草、马铃薯、番茄、生姜等重要经济植物的萎蔫。严重时,可导致作物大面积减产甚至绝收。   “青枯菌的专性噬菌体以青枯菌为食,它们可以进入青枯菌体内,进行大量增殖,并最终裂解杀死青枯菌。而土壤中还有很多土著细菌,这些细菌也有各自的‘专属’噬菌体。当青枯菌被其专性噬菌体抑制后,土壤中的其他细菌会纷纷‘占位’,细菌之间会上演一场此消彼长的攻防战。”韦中说,团队在此次研究中发现,土壤中的土著细菌,有的是青枯菌的“帮手”,有的则是青枯菌的“敌人”,这些土著细菌与其专性噬菌体互作也能间接影响植物健康。例如,一些土著细菌可以抑制青枯菌“作孽”,而其专性噬菌体的侵染压制,使它们的力量削弱,导致青枯菌更加猖狂,从而加剧病害。不同的噬菌体在土壤中像“鸡尾酒”那样混搭存在,影响着植物健康。   “这启发我们,可以充分挖掘土壤噬菌体资源,研究不同噬菌体的作用机制,以及噬菌体之间的相互影响,利用不同噬菌体联合抑制土壤病原细菌。”韦中解释。   新技术赋能,噬菌体疗法或可增强威力   与广谱抑菌的抗生素相比,噬菌体疗法有很强的专一性,能精准靶向某一类病原细菌。不过,噬菌体疗法也面临着一些技术挑战。   “与使用抗生素类似,噬菌体疗法也会不可避免地诱导靶细菌产生抗性。而且病原细菌在不断变异,抗性也会随之发生变化。这需要针对不同特点的病原细菌作研究,不断筛选噬菌体,进行精准治疗。”韦中说。   除了天然的噬菌体侵染阻碍物外,细菌也进化出一系列的抗噬菌体系统,来阻止噬菌体的侵染。因此,应用单一噬菌体往往无法有效抑制环境中多样的病原细菌,要有针对不同病原细菌的噬菌体配方。   纵然病原细菌有千般面孔,可以“七十二”变,但“魔高一尺,道高一丈”。韦中表示,目前科研人员正尝试多种方式抑制病原细菌作恶。   “首先是建立噬菌体资源库。近年来我们团队建立了全国土传青枯菌专性噬菌体资源库。库里包含了我们从全国收集的几千株青枯菌与五六百个青枯菌专性噬菌体。”韦中说,有了资源库,就可以结合培养组学、实验进化学、机器学习等,构建基因组预测噬菌体抗性的模型,选择能够侵染不同病原细菌或同一病原细菌的不同抗性突变体的噬菌体,配置噬菌体“鸡尾酒”配方,将不同的噬菌体组合,有针对性地杀灭病原细菌。   “其次,随着合成生物学的发展和对噬菌体侵染机制了解的不断深入,可以通过基因编辑定向改造噬菌体,如改变、扩大噬菌体的宿主范围以及增强噬菌体的裂解效率等。”韦中说。   人工智能也为提高噬菌体的有效性提供了更多可能。韦中认为,每个病原细菌的变异有限,人工智能可以在积累大量的实验数据和机器学习后,判断病原细菌基因突变的可能性及致病性的大小,并据此筛选、设计相应的噬菌体。   “尽管噬菌体疗法还面临诸多技术挑战,但发挥其优化微生态的优势是解决土壤病原细菌危害,提升土壤—植物系统健康的重要路径之一。”沈其荣表示。