目的 观察细胞质内的DNA依赖的干扰素调节因子激活物(DAI)对HBV复制的影响,并初步探讨其影响机制. 方法 首先将siDAI与HBV1.3复制型质粒pHY106共转染HepG2细胞,实验分两组:一组转染后6h,提取细胞总RNA,实时定量RT-PCR检测细胞内干扰素诱导的含三角形四肽重复蛋白(IFIT)1与白细胞介素6的表达水平.另一组在转染后第4天收集细胞上清液,酶联免疫吸附法检测HBsAg与HBeAg的表达水平;抽提细胞内的HBV核心颗粒,Southern blot 检测细胞内HBV复制中间体(松弛环状DNA、双链线性DNA、单链DNA).然后将siDAI、siTBK与HBV1.3复制型质粒pHY106共转染HepG2细胞,同样方法检测转染后细胞上清液中HBsAg和HBeAg的表达.两组间均数比较采用独立样本t检验,多组间比较采用方差分析. 结果 siDAI转染导致了胞内DAI表达下调;DAI表达水平下降后HBV的复制与病毒蛋白表达受到了抑制:HBsAg和HBeAg的相对表达水平在siDAI组分别为0.0195±0.0050、0.0140±0.0040,在空白对照组为0.3150±0.0200、0.0124±0.0135,差异有统计学意义(t=14.770,P＜0.05;t=7.777,P＜0.05);且抑制效果呈剂量依赖性.下调DAI后,对HBV诱导的IFIT1、白细胞介素6表达没有影响(P＞0.05).同时下调DAI和TBK1后,HBV蛋白表达仍然受到抑制. 结论 下调DAI能抑制HBV的复制与蛋白表达,其机制与Ⅰ型干扰素及核因子-κB信号通路无关.
