埃博拉病毒(EBOV)是丝状病毒科中的一种非分段的负义RNA病毒(NNSV),被认为是地球上最致命的病原体之一。对于RNA病毒,细胞或病毒编码的RNA解旋酶通过重构病毒RNA结构和/或解除复制过程中产生的病毒dsRNA在病毒生命周期中发挥关键作用。然而,从未发现解旋酶或解旋酶样活性与任何NNSV编码的蛋白质结合,并且尚不清楚NNSV的复制是否需要任何病毒或细胞解旋酶的参与。在这里,我们显示尽管不含有保守的NTP酶/解旋酶基序,但EBOV VP35具有NTP酶和解旋酶样活性,它们可以分别以NTP依赖性方式水解所有类型的NTP和解开RNA螺旋。此外,盐酸胍,一种FDA批准的化合物和某些病毒解旋酶的抑制剂,抑制VP35的NTP酶和解旋酶样活性以及EBOV小基因组复制子在细胞中的复制/转录,突出了VP35解旋酶样的重要性。