《使用荧光素-硼酸检测细胞衍生的过氧亚硝酸盐》

  • 来源专题:重大新药创制—内分泌代谢
  • 编译者: 李永洁2
  • 发布时间:2016-09-19
  • 在生物系统中过氧化亚硝酸盐(ONOO- / ONOOH)的特异性和灵敏的检测是一个很大的挑战,因为其对生物分子的几个高反应性。在此,我们验证了使用荧光素硼酸(FL-B)的作为用于在两个不同的细胞模型生物体关联的条件下直接检测过氧亚硝酸盐的一个高度敏感的荧光探针的优点。 FL-B的合成通过用高纯度(> 99%)和总产率(?42%)非常简单的两步转换的合成路线获得。进行FL-B与有关生物氧化剂包括过氧化氢(H2O2),次氯酸(次氯酸)和过氧亚硝酸盐的反应性的分析。对过氧亚硝酸盐与FL-B中的反应速率常数为1.7×10 6 M-1-1,一百万次以上为过氧化氢测定的速率常数快(K = 1.7 M-1S-1)和2700次比次氯酸快(6.2 ×102 M-1S-1),在37℃和pH 7.4。 FL-B与过氧亚硝酸盐的反应甚至在生理浓度的CO 2,一公知的过氧化亚硝酸盐的反应物的存在是显著。实验和模拟的动力学分析证实,FL-B的主氧化处理经由直接双分子反应发生与过氧亚硝酸盐本身,而不是与过氧亚硝酸盐衍生自由基。 FL-B已成功应用于检测endogenously-的由内皮细胞和巨噬细胞,phagocyted寄生虫产生的过氧亚硝酸盐。此外,所生成的数据允许推定的过氧亚硝酸盐的实际细胞内通量。 FL-B的显示不被在浓度有毒高达1毫米24小时。 FL-B的显示出比香豆素硼酸更敏感,由于较高的摩尔吸光系数和量子产率。

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