《传染性疾病诊断的 CRISPR 方法》

  • 来源专题:新发突发疾病防治
  • 编译者: 张玢
  • 发布时间:2017-11-13
  • 在过去的20年里, 聚合酶链反应 (PCR) 和 DNA 测序方法的巨大进展改变了临床病毒学和微生物学实验室。这些新的方法能够准确和快速地诊断出广泛的传染性疾病, 并有助于监测对感染的治疗, 如由人体免疫机能丧失病毒和巨细胞病毒引起的反应。然而, 在我们的诊断医疗中仍然存在一个重要的缺口: 可以在护理点进行的快速、可靠、易用、价格低廉的诊断测试, 。多年来,在资源有限的地区一直有人要求进行这些类型的测试, 但是这种测试可能在广泛的设置中具有重要意义, 它提供了能够实时影响临床决策的结果。

    Gootenberg等人构建了含有寨卡病毒(ZIKV)基因组片段和登革病毒(DENV)的慢病毒。该系统检测浓度低至2 attomolar(aM)的ZIKV序列,并能区分ZIKV和DENV,这是临床应用的重要特征(图2图2应用灵活性)。作者通过冷冻干燥试剂,然后将其重新水化在纸上的斑点,探讨了该方法在现场的潜在用途。检测方法的性能还通过使用来自4名感染ZIKV的患者的血清和尿液样品来评估;通过定量实时PCR验证,所有四个临床样品中的测试均检测到ZIKV,RNA浓度范围为每毫升8.25×105个拷贝至每毫升1.25×103个拷贝。

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    • 中国武汉暴发的新型冠状病毒(nCoV-2019)在全国范围内迅速蔓延,世界其他地区也有一些病例。尽管大多数患者出现轻度发热性疾病,并伴有斑块性肺部炎症,但仍有相当一部分患者出现严重的急性呼吸窘迫综合征(ARDS),目前病死率为2.3-3%。诊断基于临床病史以及实验室和胸部X线影像学发现,目前的确诊主要依赖于核酸的测定,这在促进患者隔离、治疗和评估感染活动中起着重要作用。但是,由于处理当前流行病的能力有限,检测试剂盒的供应不足,只能对一部分可疑病例进行检测,导致病例更新的不完整和不准确以及诊断的延迟。此外,也没有足够的时间来评估检测的特异性和敏感性。常规的血清学检测,例如针对特定IgM和IgG抗体的酶联免疫检测(ELISA),应提供高通量的替代方法,以便对所有可疑患者进行统一检测,有助于更完整地鉴定感染病例并避免未选患者之间不必要的交叉感染。