《embC-embA基因间隔区突变对结核杆菌耐乙胺丁醇的影响研究》

  • 来源专题:结核病防治
  • 编译者: 李阳
  • 发布时间:2014-10-17
  • 结核杆菌对乙胺丁醇(EMB)耐药性的快速增加给结核病的诊断和治疗带来了威胁。基于此,来自上海肺科医院的7位研究人员合作分析了从中国东部地区搜集到的乙胺丁醇临床耐药菌株中embC-embA基因间隔区(IGR)突变在细菌EMB耐药性产生过程中发挥的作用,其相关成果于2014年9月2日发表在Antimicrobial Agents and Chemotherapy上。

    研究共搜集到767个结核杆菌临床菌株,采用MGIT 960系统和最小抑菌浓度(MIC)测试法分析了它们对EMB的药物易感性,并对这些菌株的embC-embA基因间隔区进行了测序。此外,研究还依据已报道的重组耻垢分枝杆菌基因检测结果对embC-embA基因间隔区突变的转录活性进行了检测,并采用凝胶迁移率变动分析法(GMSA)研究了IGR突变对IGR与EmbR基因(embAB基因的一个转录调节因子)结合的影响。

    相关系数分析结果显示embC-embA基因间隔区突变与EMB耐药性存在相关性,具体为存在IGR突变状况的临床菌株的embA和embB mRNA水平均明显升高,且细菌针对EMB的最小抑菌浓度(MICs)也相应地升高。此外,研究还发现当菌株转变为耻垢分枝杆菌菌株时,其IGR突变的转录活性更强;相较于野生型片段而言,发生突变的IGRs与EmbR基因的亲和力更强;若将基因间隔区突变作为一种额外的标志物,则分子药敏试验(DST)的灵敏度可从65.5%提升至73.5%。究其原因,是由于embC-embA IGR突变增强了EmbR基因与embAB基因启动子区域间的结合,进而提升了embAB基因的表达,从而促进了细菌对EMB耐药性的增加。

    综上所述,识别IGR的突变并将其作为EMB耐药性检测的一个标志物能够提高分子药敏试验的灵敏度。

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    • 编译者:李阳
    • 发布时间:2014-12-31
    • 该研究的主要内容可归纳为以下5个方面: 1. 评价了牛分枝杆菌对6种抗结核药物的敏感性; 2. 研究中采用了一种标准化方法和一种简化的二分刃天青微量滴定法(d-REMA); 3. 二分刃天青微量滴定法(d-REMA)与对照方法的检测结果具有良好的一致性; 4. 在embB基因中鉴定出了4种新的单核苷酸多态性; 5. 未发现embB基因表达谱与乙胺丁醇耐药结果之间存在关联关系。 现对该研究的主要内容作一简要介绍: 来自意大利国立卫生研究院的研究人员采用MiddleBrook 7H11琼脂培养法(金标准)以及一种简化的二分刃天青微量滴定法(d-REMA)评估了源自动物的吡嗪酰胺耐药性牛分枝杆菌分离株对5种抗结核药物的敏感性,其相关成果于2014年12月29日在线发表于国际传染病杂志上。 研究首先对53个牛分枝杆菌分离株进行分类并检测了它们对异烟肼、利福平、链霉素、乙胺丁醇、卡那霉素及吡嗪酰胺的耐受性(其中吡嗪酰胺为对照组药物);然后基于已获得的耐受性检测结果,对所有分离株的pncA和embB基因进行PCR扩增和DNA测序,发现所有的牛分枝杆菌分离株分为21个间隔区寡核苷酸分型(Spoligotype)/ MIRU-VNTR基因分型,且用琼脂培养法和d-REMA法均检测出所有菌株对吡嗪酰胺耐药。pncA基因测序结果证实H57D突变引起耐药性的产生;接着研究人员采用基于琼脂的金标准法检测出所有菌株对除吡嗪酰胺之外的其它5种药物均敏感,而采用d-REMA法检测出41个菌株对5种药物均敏感,其余12个菌株对乙胺丁醇的耐药检测结果不明确。 此外,研究人员还观察了53个分离株embB基因突变状况,并从中鉴定出4种新的单核苷酸多态性,但采用基于琼脂的金标准法未发现embB基因表达谱与乙胺丁醇耐药结果之间存在关联关系。 综上所述,所有的牛分枝杆菌分离株对一些最常见的抗结核治疗药物均是敏感的;二分刃天青微量滴定法(d-REMA)与基于琼脂的金标准法的检测结果具有良好的一致性;在乙胺丁醇敏感株中发现了4种新型embB突变。
  • 《快速纠正结核分枝杆菌orn基因的移码突变可产生可逆的乙胺丁醇耐药性和小菌落变异形态》

    • 来源专题:结核病防治
    • 编译者:蒋君
    • 发布时间:2020-09-14
    • 研究人员已经确定了结核分枝杆菌orn基因可逆移码突变引起的可逆性高水平乙胺丁醇(EMB)耐药性的未知机制。orn的移码突变产生小菌落变异(SCV)表型,但这种突变不会改变任何治疗野生型结核分枝杆菌药物的MICs。然而,在低水平EMB耐药双embB-aftA突变体(MIC = 8μg/ml)中,相同的orn突变可产生EMB MIC为32μg/ml的SCV。可逆性耐药与药物持久性表型无法区分,因为进一步培养这些orn-embB-aftA SCV突变体可导致orn移码快速回复,重建正确的orn开放阅读框,使培养物恢复到正常的菌落大小,并将EMB-MIC恢复到亲本菌株的(8μg/ml)。与野生型结核分枝杆菌相比,orn-embB-aftA突变体的转录组学分析发现embC的表达相对增加了27倍,embC是EMB的细胞靶点。与亲本embB-aftA突变体相比,embC在orn-embB-aftA突变体中的表达也增加了5倍,而其大菌落orn移码回复体orn-embB-aftA突变体的embC表达水平与亲本embB-aftA菌株相似。可逆移码突变体可能是人类结核病微生物耐药性的可逆形式。