《英国科学家构建出仅使用61个密码子的大肠杆菌》

  • 来源专题:生物安全知识资源中心 | 领域情报网
  • 编译者: hujm
  • 发布时间:2019-05-21
  • 在一项新的研究中,来自英国剑桥大学的研究人员利用他们在实验室合成的基因组替换了大肠杆菌的基因。相关研究结果于2019年5月15日在线发表在Nature期刊上,论文标题为“Total synthesis of Escherichia coli with a recoded genome”。在这篇论文中,他们描述了这种基因组替换和对冗余的遗传密码的剔除。

    遗传密码是生命的程序---它的排列导致用于控制细胞内功能的蛋白产生。任何给定生物的基因组都非常复杂,但是它都是基于由三个相邻的DNA碱基组成的密码子。每个密码子中的任何一个碱基仅选自四个碱基中的一个,这意味着仅存在64种可能的组合。但是只有20种天然的氨基酸,这意味着在一种给定的基因组中必定存在一些不需要的密码子。之前的研究已表明至少有一些密码子用作备份(冗余),而有些密码子用于其他目的,还有许多密码子的功能尚未被理解。在这项新的研究中,这些研究人员有两个目标:第一个是在他们的实验室中合成大肠杆菌的基因组---总共400万个碱基对(bp);第二个是找出如果去除了DNA中的一些冗余密码子会导致大肠杆菌发生什么。

    这些研究人员报道了通过在计算机上对大肠杆菌的DNA进行重新编码,剔除了多个冗余密码子,从而实现了这两个目标。一旦这种所需的基因组被重新设计出后,就将它分裂成较小的DNA片段,随后送至DNA合成仪中进行合成。然而,合成的DNA产量仍然需要调整,为此,他们不得不将较小的DNA片段拼接成较长的片段,随后才能将合成出的基因组放入活的大肠杆菌中---他们将由此经过编辑的大肠杆菌命名为Syn61,这是因为在64个可能的密码子中,它仅使用61个密码子。

    这些研究人员报道,由此产生的大肠杆菌的生长需要更长的时间,但除此之外,它的表现与未经编辑的大肠杆菌一样。他们提出在未来的研究工作中,有可能用其他序列替换他们移除的冗余密码子来构建出具有特殊能力的细菌,比如制造自然界中不存在的新型生物聚合物。

  • 原文来源:https://www.nature.com/articles/s41586-019-1192-5
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    • 编译者:hujm
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    • 英国剑桥大学的科学家在实验室成功创造了世界上第一个完全合成并且彻底改变DNA密码的生命体。 2019年5月16日,发表在Nature上的研究显示,剑桥大学分子生物学实验室的研究人员经过两年的努力,读取并重新设计了大肠杆菌的DNA,然后用经过改造的合成基因组创建了新的细胞版本。 人工基因组包含400万个碱基对,该研究团队通过移除一些“多余的”密码子来重新设计大肠杆菌的基因组,每当遇到TCG(一种制造丝氨酸的氨基酸密码子)时,他们就把它改写成AGC,以此类推,他们也系统地替换了另外两个密码子。 这样,将3个“无用的”密码子替换成3种终止密码子,把人工重新设计合成的遗传密码添加到原始大肠杆菌基因组中,取代了其天然的基因组。这种名为Syn61的合成生物比正常体稍长,生长速度也慢一些,但仍然存活了下来。 这项研究将合成基因组学领域提升到了一个新的水平,不仅成功构建了迄今为止最大的合成基因组,而且编码变化也达到了迄今为止的最高水平。 这种细菌的存在证明,生命可以存在于有限的遗传密码中,并为生物合成药物、材料,或添加病毒抗性等新特性提供了路径。 目前有包括哈佛大学在内的很多科学家正在制造更多编码变化的细菌基因组,这一方面推动了合成生物学的发展,另一方面给生命伦理学研究提出更多挑战,生命科学的发展始终是一把双刃剑,一方面是福祉,一方面是深渊。
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    • 编译者:hujm
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    • 在一项新的研究中,来自美国哈佛医学院等研究机构的研究人员对一种大肠杆菌菌株进行了改造,使其对自然界的病毒感染具有免疫力,同时也将这种细菌或其改造的基因逃逸到野外的可能性降到最低。这是遗传工程和合成生物学方面的一个进步,有望在利用细菌生产药物(如胰岛素)以及其他有用物质(如生物燃料)时减少病毒污染的威胁。目前,感染大量细菌的病毒可能会阻止生产,损害药物安全,并花费数百万美元。相关研究结果发表在2023年3月23日的Nature期刊上,论文标题为“A swapped genetic code prevents viral infections and gene transfer”。 论文共同通讯作者兼论文第一作者、哈佛医学院布拉瓦特尼克研究所George Church实验室的遗传学研究员Akos Nyerges说,“我们相信我们开发出第一种设计出一种不能被任何已知病毒感染的有机体的技术。我们不能说它是完全抗病毒的,但到目前为止,根据广泛的实验室实验和计算分析,我们还没有发现一种可以感染它的病毒。” 他说,这项新的研究还提供了第一种内置的安全措施,防止经过基因改造的遗传物质整合到天然的细胞中。 这些作者说,他们的研究提出了一种使任何有机体对病毒免疫并防止基因流入和流出转基因生物(genetically modified organism, GMO)的通用方法。随着不同的研究团体探索安全部署转基因生物以种植作物、减少疾病传播、产生生物燃料和清除开放环境中的污染物,此类生物遏制战略越来越受到关注。 建立在以前的研究基础上 这些发现建立在基因工程师为实现一种有用的、安全的、抗病毒的细菌所做的早期努力之上。2022年,剑桥大学的一个研究团队认为他们制造出了一种对病毒免疫的大肠杆菌菌株(Science, 2022, doi:10.1126/science.add8943)。但随后Nyerges与研究员Siân Owen和研究生Eleanor Rand在论文共同作者、哈佛医学院布拉瓦特尼克研究所生物医学信息学助理教授Michael Baym的实验室里合作。当他们对当地充斥着大肠杆菌的场所---包括鸡舍、老鼠窝、污水以及哈佛医学院校园街边的泥泞河---进行采样时,他们发现病毒仍然可以感染这种他们制造出的经过基因改造的细菌。Nyerges说,发现这种经过基因改造的细菌并不完全抗病毒,“这是个坏消息”。 最初的方法是对大肠杆菌进行基因重编程,使它们的所有维持生命的蛋白来自61个密码子,而不是自然产生的64个。这个想法是病毒将无法劫持这些细菌细胞,因为没有缺失的三个密码子,它们就无法复制。 然而,在这项新的研究中,这些作者发现仅仅剔除密码子是不够的。一些病毒能够绕过缺失的三个密码子,成功地感染这种基因改造的细菌。 因此,Nyerges及其同事们开发了一种方法来改变这些密码子告诉有机体要制造的东西---这是科学家们在活细胞中没有做到的。 迷失在翻译中 关键在于tRNA。每个tRNA的作用是识别一个特定的密码子并将相应的氨基酸添加到正在构建的蛋白中。例如,密码子TCG告诉其匹配的tRNA要添加一种称为丝氨酸的氨基酸。 在这种情况下,剑桥大学的那个研究团队剔除了TCG和同义密码子TCA,此外还剔除了相应的tRNA。 如今,在这项新的研究中,这些作者如今添加了新的、欺骗性tRNA来代替它们:当这些tRNA看到TCG或TCA时,它们会添加亮氨酸而不是丝氨酸。Nyerges说,“从物理和化学角度来看,亮氨酸与丝氨酸的差别是比较大的。” 当入侵的病毒注入它自己的充满TCG和TCA的遗传密码并试图告诉大肠杆菌制造病毒蛋白时,这些欺骗性tRNA扰乱了病毒的指令。插入错误的氨基酸会导致错误折叠的、无功能的病毒蛋白。这意味着病毒无法复制,也就无法继续感染更多的细菌细胞。 然而,病毒也配备了自己的tRNA。这些tRNA仍然可以准确地将TCG和TCA变成丝氨酸。但Nyerges及其同事们提供的证据表明,他们引入的欺骗性tRNA非常擅长它们的工作,以至于它们压制了病毒自己的tRNA。 Nyerges说,“证实交换有机体的遗传密码是可能的,这是非常具有挑战性的,也是一项巨大的成就,而且只有在我们这样做的情况下才有效。” 这些作者说,这项新研究可能清除了使细菌对所有病毒免疫的最后一个障碍,尽管仍有可能出现能够破坏这种保护的病毒。鉴于病毒克服这种密码子交换需要同时产生几十种特定的突变,他们对此很有信心。Nyerges说,“这对自然进化来说是非常、非常不可能的。” 安全措施 这项新研究包含了两种独立的保障措施。第一种保障措施是防止水平基因转移,这是一种不断发生的现象,在这种现象中,遗传密码片段及其伴随的特征,如抗生素耐药性,会从一种有机体转移到另一种有机体。 Nyerges及其同事通过在他们的经过基因改造的大肠杆菌细胞中对基因进行替换,使得所有招募亮氨酸的密码子被替换为TCG或TCA,即在未经过基因改造的有机体中招募丝氨酸的密码子,从而缩短了这一结果。由于这些欺骗性的tRNA,它们仍然在这些地方正确地制造了亮氨酸。 但是,如果另一种有机体将任何经过改造的DNA片段纳入自己的基因组,那么该有机体的天然tRNA就会将TCG和TCA解释为丝氨酸,并最终产生不具备任何进化优势的垃圾蛋白。同样地,这些作者发现,如果大肠杆菌的一种欺骗性tRNA被转移到另一种有机体中,它将丝氨酸密码子误读为亮氨酸密码子会损害或杀死细胞,从而阻止进一步传播。 Nyerges说,“任何逃逸出去的经过修饰的tRNA都不会走远,因为它们对天然有机体是有毒的。”他说,这项新研究代表了第一种防止转基因生物的基因水平转移到自然生物中的技术。 对于第二种保障措施,这些作者将他们的经过基因改造的大肠杆菌菌株本身设计为无法在受控环境之外生存。他们利用Church实验室开发的一项现有技术(Nature, 2015, doi:10.1038/nature14121),使大肠杆菌依赖一种实验室制造的氨基酸,而这种氨基酸在野外并不存在。比如,培养这些大肠杆菌以生产胰岛素的工人会给它们喂食这种非天然的氨基酸。但是如果有任何细菌逃脱,它们就会失去获得这种氨基酸的机会而死亡。 Nyerges强调,基于此,没有人类或其他生物有被“超级细菌”感染的风险。Nyerges期待着探索密码子重编程作为一种诱导细菌生产医学上有用的合成材料的工具,否则将需要昂贵的化学方法。 参考资料: Akos Nyerges et al. A swapped genetic code prevents viral infections and gene transfer. Nature, 2023, doi:10.1038/s41586-023-05824-z.