《苏州医工所缪鹏课题组在电化学/荧光双模传感技术方面取得进展》

  • 来源专题:生物安全知识资源中心—领域情报网
  • 编译者: hujm
  • 发布时间:2022-07-20
  •  电化学传感器是利用待测物所引发的电信号变化与浓度或其他物理量之间存在的相关性关系进而定性或定量分析的一种方法。荧光传感器则是通过将待测物与识别基团特异性结合的信息传递给荧光基团,引发荧光强度或发射波长的改变实现定性或定量检测的方法。这两种技术所涉及的信号源及构建方法往往差异较大。在同一体系中采用两种技术进行同步检测不仅能够有效提高检测准确性,还能够降低所获取信号受到背景信号、仪器波动等因素的影响,在基础研究、环境检测、临床检验等领域具有广泛的应用前景。

      近期,苏州医工所缪鹏研究员课题组发展了基于“手拉手”式DNA纳米结构组装的设计,并基于亚甲基蓝/红色荧光碳量子点开发了一种新型的针对循环肿瘤DNA的电化学/荧光双模传感器。首先将发卡探针A固定于电极表面;与目标核酸反应后,游离的单链区域可用于打开发卡探针B;同理,发卡探针C可通过类似的反应结合为Y型结构并置换出目标核酸序列用于循环反应;相邻结构间的单链可以进一步结合形成大型组装体。反应的可行性可通过理论计算与凝胶电泳成像证实(图1);同时,所合成的碳量子点抗干扰性强,在生理环境下能够保持高度的荧光稳定性(图2)。通过分析相应发夹探针末端标记的电化学与荧光信号源,能够有效地完成双模探测。通过一系列的条件优化与定量测试,建立了荧光强度、电化学强度与目标核酸浓度的线性校准曲线,能够实现6个数量级的较宽线性范围,同时也可通过荧光成像方便快捷地区分目标核酸的含量(图3)。本工作中发展的双模传感器设计新颖,具有较高的灵敏度,可扩展性强,能够为核酸分析及临床诊断提供有力的工具。

      本工作得到了苏州市基础研究试点项目(SJC2021016)的资助,结果已发表Chemical Engineering Journal, 2022, 450, 138069 (IF=16.744)

      论文链接: https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S1385894722035550

  • 原文来源:http://www.sibet.cas.cn/kxyj2020/kyjz_169572/202207/t20220718_6482410.html
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    • 编译者:hujm
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    •  核酸检测的应用主要包括病原体分析、遗传疾病鉴定、肿瘤早期诊断、酶活分析等。例如,循环肿瘤DNA(circulating tumor DNA, ctDNA)是一种来源于恶性细胞的游离DNA片段,携带肿瘤特异性序列改变。ctDNA释放的确切机制目前仍未知,推测可能与濒死细胞的凋亡或坏死有关。通过对ctDNA的定量分析可以获得一系列肿瘤病灶的信息,包括基因点突变、基因组完整程度等。因此ctDNA是一种个性化的肿瘤标志物,在癌症诊断和恶性程度评估等方面能够起到关键作用。   近期,苏州医工所缪鹏研究员课题组发展了一种基于环状双足DNA步行反应的电化学纳米机器,用于ctDNA等核酸指标的高灵敏分析。   首先通过序列设计在DNA探针A与B之间搭建pH可控调节的分子间三螺旋DNA纳米结构,构建出可再生的修饰电极界面。   随后,设计了一种简单有效的链置换策略来放大目标核酸序列的信息。通过将引物与模板序列进行一体化设计,整合于单条发夹结构DNA探针中,有效提升了反应速率,在目标核酸序列存在条件下可生成大量包含目标序列的单链DNA用于下游反应。   接着,发展了环状双足DNA步行反应策略。设计的哑铃结构DNA探针环部分包含有DNA核酶,初始状态下无法与电极界面轨道链结合反应,处于失活状态。当其被上步链置换反应产生的单链DNA所作用时,可逐步释放哑铃环,同时,该探针的5’和3’端之间依次发生自身杂交,形成环状DNA结构。环状双足步行链可进一步与修饰有轨道链的电极发生作用,持续催化裂解反应从而诱导电化学响应的变化。   基于该策略,在优化的实验条件下实现了2.2 aM(约1.3 copy/μL)的核酸检测灵敏度。此外该方法具有良好的序列选择性。进一步对临床血清样本、咽拭子样本等进行了测试验证,通过对异常电化学信号的分析可以在健康对照组中有效分辨出相应患者。该策略也为目前迫切需求的急性感染性疾病病毒核酸检测提供了一种快速高灵敏的新方法。   相关工作得到了国家重点研发计划(2017YFE0132300)等项目的资助。结果已发表ACS Nano, 2022, 16, 4726-4733 (IF=15.881)   论文链接: https://pubs.acs.org/doi/10.1021/acsnano.1c11582
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    • 来源专题:生物安全知识资源中心—领域情报网
    • 编译者:hujm
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    • 杂交链式反应是Dirks和Pierce于2004年提出的一种无酶参与的核酸聚合反应,由目标分子引发若干条热力学稳定的且具有特定二级结构的DNA燃料链发生级联反应,最终产生具有切口的超长链DNA纳米结构。运用杂交链式反应可以实现目标分子的信号放大。   苏州医工所缪鹏课题组前期已基于该技术发展了若干种高性能传感器用于生物活性分子的检测(Nanoscale, 2022, 14, 612; Part. Part. Syst. Charact., 2020, 37, 1900488; ACS Appl. Mater. Interfaces, 2019, 11, 41157; Sens. Actuators, B, 2019, 297, 126788; Chem. Eng. J., 2018, 353, 305);总结了该领域的当前进展(ACS Appl. Mater. Interfaces, 2021, 13, 38931; TrAC-Trends Anal. Chem., 2017, 94, 1-13);并提出了若干种新型的杂交链式反应组装方式(Anal. Chem., 2022, 94, 14755; Anal. Chem., 2020, 92, 12700; Anal. Chem., 2020, 92, 12026, Chem. Commun., 2020, 56, 1175)。   近期,该课题组发展了一种新型的线性杂交体系,并结合磁性纳米颗粒及银纳米颗粒用于目标核酸的高灵敏、高特异性分析。首先制备四氧化三铁纳米颗粒用于反应后的快速磁分离,同时在其表面还原微小金纳米颗粒用于固定巯基修饰的DNA探针A。基于纳米材料巨大的比表面积,实现了大量探针A链的固定。该探针包含四个功能区,其中有两个与目标miRNA互补配对,在形成DNA/RNA杂合双链后可以被双链特异性核酸酶(DSN)所识别并作用。该杂合双链中的DNA被特异性消化后释放miRNA用于循环反应,同时产生两条单链探针B和C进一步作用于电极界面的DNA三棱体纳米结构。该结构具有几何刚性,为捕获探针B和C提供了适宜的空间,且识别效率显著提高;在加入特定设计的燃料链H1、H2、H3、H4后,实现了梯形杂交链式反应产物的生长;进一步捕获银纳米颗粒作为电化学探针后,可以通过分析溶出伏安响应对目标miRNA进行定量。   本工作中涉及到的纳米材料表征完备(图1),且相应的反应通过聚丙烯酰胺凝胶电泳、交流阻抗谱、循环伏安图、线性扫描伏安图得到了验证(图2)。在优化的实验条件下能够实现5×10-18 mol/L的检测限,具有良好的序列选择性,并在实际临床样本中进行了检验取得了较好的结果。   本工作得到了苏州市基础研究试点项目(SJC2021016)的资助,结果已发表Biosensors and Bioelectronics, 2023, 220, 114900 (IF=12.545).   论文链接: https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S095656632200940X