冠状病毒（cov）以其庞大的RNA基因组和复杂的RNA合成机制而引人注目。双功能nsp14包含3′-到5′-核糖核酸酶（ExoN）和鸟嘌呤-N7-甲基转移酶（n7mtase）结构域。尽管后者可能支持mRNA上限，但ExoN被认为在基因组复制过程中介导校对。与此一致，小鼠肝炎病毒（MHV）和严重急性呼吸综合征冠状病毒（SARS-CoV）的外显子敲除突变体先前被报道具有致残但可行的超突变表型。值得注意的是，利用反向遗传学，一大组相应的外显子敲除突变现已被发现对另一种贝塔科龙病毒，中东呼吸综合征冠状病毒（MERS-CoV）是致命的。对于13个突变体，病毒后代无法恢复，除非偶尔发生逆转。只有一个突变体是可行的，可能是因为它的E191D替代物高度保守。值得注意的是，一个SARS-CoV-2外显子敲除突变体被发现不能复制，类似于先前对α-和γ-谷丙核糖核酸病毒的观察，但与密切相关的SARS-CoV的外显子敲除突变体的表型形成鲜明对比。随后，我们用纯化的重组MERS-CoV-nsp14建立了体外检测方法，以检测其外显子和N7-MTase活性。所有在反向遗传学中被证明是致命的外显子敲除突变被发现严重降低外显子活性，而不影响N7 MTase活性。我们的研究强烈表明，CoV nsp14外显子具有附加功能，这显然是病毒RNA合成的关键，因此不同于先前MHV和SARS-CoV研究的校对功能，该功能旨在提高长期复制保真度。
