来自麻省大学医学院的科学家开发出了一项利用CRISPR/Cas9的新技术:CRISPRainbow,它使得研究人员能够在活细胞中标记和追踪7个不同的基因组位点。这一标记系统将成为实时研究基因组结构的一个宝贵的工具。
当前的一些技术最多只能在活细胞中一次追踪三个基因组位点。标记更多的位点要求通过用甲醛来浸泡细胞固定它们,因此这会杀死细胞,使得无法观察染色体结构响应刺激或随时间推移发生的改变。
为了克服这一技术障碍,马涵慧转向了CRISPR/Cas9。为了利用CRISPR/Cas9复合物沿着基因组标记出特异的位点,马涵慧和同事们构建出了一种突变使得Cas9核酸酶失活,因此它只能结合DNA而无法切割基因组。在失活后,CRISPR/Cas9元件借助于研究人员编程的向导RNA送到基因组上的特异位点。
为了在CRISPR/Cas9复合物结合基因组后能够看到和追踪它,马涵慧设计向导RNA结合了红、绿、蓝三种原色荧光蛋白其中的一种。随后可以在显微镜下实时观察和追踪到这些蛋白。通过将第二种荧光蛋白附着到向导RNA上,马涵慧组合三种原色生成了另外三种蓝绿色、洋红色和黄色的标记。组合所有三种原色则可获得第7种白色的标记。