《来自伪狂犬病病毒的重组gI蛋白片段的免疫原性表征及其在猪中的诊断用途评估》

• 来源专题：农业生物安全
• 编译者： 任洁
• 发布时间：2023-11-29

血清学检测是诊断伪狂犬病毒(PRV)感染的重要方法。我们的目的是研究PRV的包膜糖蛋白I (gI)，一种强免疫原，以及它作为一种高效、低成本诊断试剂的潜力。本研究以PRV SC株的DNA为模板，利用合成的引物通过PCR扩增出重组gI片段(633 bp)，并连接到pET-30a表达载体上。将构建物转移到大肠杆菌中进行原核表达，用猪抗PRV阳性血清进行Western blot分析，鉴定表达产物的抗原性。重组蛋白经Ni柱纯化，用纯化的gI蛋白免疫BALBc小鼠，获得抗gI阳性血清。PRV感染PK-15细胞48 h后，用抗gI小鼠血清荧光免疫法鉴定纯化的gI蛋白的免疫原性。表达重组质粒pET-30a-gI，经尿素变性、透析复生性获得天然gI蛋白。设计了含1.0 gmL纯化gI蛋白的小规模ELISA检测方法，对80份猪血清进行检测，并采用IDEXX试剂盒将ELISA检测结果与竞争性ELISA (cELISA)检测结果进行比较，一致性为97.5%。结果表明，截断的gI蛋白可能是一种潜在的诊断试剂。