《来自伪狂犬病病毒的重组gI蛋白片段的免疫原性表征及其在猪中的诊断用途评估》

  • 来源专题:农业生物安全
  • 编译者: 任洁
  • 发布时间:2023-11-29
  • 血清学检测是诊断伪狂犬病毒(PRV)感染的重要方法。我们的目的是研究PRV的包膜糖蛋白I (gI),一种强免疫原,以及它作为一种高效、低成本诊断试剂的潜力。本研究以PRV SC株的DNA为模板,利用合成的引物通过PCR扩增出重组gI片段(633 bp),并连接到pET-30a表达载体上。将构建物转移到大肠杆菌中进行原核表达,用猪抗PRV阳性血清进行Western blot分析,鉴定表达产物的抗原性。重组蛋白经Ni柱纯化,用纯化的gI蛋白免疫BALBc小鼠,获得抗gI阳性血清。PRV感染PK-15细胞48 h后,用抗gI小鼠血清荧光免疫法鉴定纯化的gI蛋白的免疫原性。表达重组质粒pET-30a-gI,经尿素变性、透析复生性获得天然gI蛋白。设计了含1.0 gmL纯化gI蛋白的小规模ELISA检测方法,对80份猪血清进行检测,并采用IDEXX试剂盒将ELISA检测结果与竞争性ELISA (cELISA)检测结果进行比较,一致性为97.5%。结果表明,截断的gI蛋白可能是一种潜在的诊断试剂。
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  • 《用于全球蛋白质功能及免疫原性研究的结核分枝杆菌全蛋白质组芯片研制》

    • 来源专题:结核病防治
    • 编译者:李阳
    • 发布时间:2015-03-20
    • 就在几年前,人们普遍认为结核病这一古老而又新发的传染病即将成为继天花之后第二种被彻底消灭的疾病。然而,数年过去了,结核病却重新成为了我们的心腹大患,持续性地危害着人类的健康,原因主要有三点:一是疫苗使用近百年,保护率和保护期受到质疑;二是现有主要药物使用历史已约半世纪,耐药性日趋严重;三是诊断缺乏标识物,检出率低。因此,如何能够迅速检测诊断结核病病原体已经成为摆在科研工作者面前的一个重大问题。 基于此,来自中国科学院生物物理所、上海交通大学、中国科学院武汉病毒所、广东省结核病控制中心、中国科学院武汉水生生物所、上海市疾病预防控制中心和广东体必康生物科技有限公司等机构的学者和临床专家们合作构建了首张结核分枝杆菌全蛋白质组芯片,其相关成果于2014年12月11日在线发表于Cell Reports杂志上。 该项研究构建的蛋白质组芯含有4262个结核分枝杆菌基因组阅读框架编码产物,覆盖其基因组编码蛋白质的95%,可用于全局性蛋白-蛋白相互作用分析,以研究人免疫细胞-结核杆菌的互作机制;小分子与蛋白相互作用分析,以进行药物靶标的全局性发现;高通量血清分析,以系统性地进行结核病诊断生物标识物的发现。 此外,文章基于该芯片分析了蛋白激酶PknG及小分子C-di-GMP的相互作用蛋白,发现结核杆菌的鼠李糖通路可能会受到以上两个分子的同步调控,并且还利用芯片发现了14个可以区分结核病人和治愈者的标识蛋白。   结核分枝杆菌蛋白质组芯片为结核病研究打开了新的窗口,可以系统性发现新的免疫原和标识物,从而发展新型高效疫苗、新药和新的检测技术,是结核病基础研究强有力的新方法学平台。   该项研究历时五年完成,得到了国家“十二五”传染病重大专项、中国科学院重点项目、国家863项目以及国家自然科学基金项目等的支持。
  • 《使用DNA疫苗候选物的母体免疫在免疫活性BALB / c小鼠中引发针对产后寨卡病毒感染的特异性被动保护》

    • 来源专题:新发突发疾病(新型冠状病毒肺炎)
    • 编译者:张玢
    • 发布时间:2018-08-08
    • 寨卡病毒(ZIKV)感染与胎儿小头畸形和成人格林 - 巴利综合征甚至男性不育密切相关。开发安全有效的疫苗是一项紧迫的国际优先事项,可为育龄妇女及其子女提供保护。在该研究中,用基于DNA的疫苗候选物pVAX1-ZME免疫雌性免疫活性BALB / c小鼠,表达ZIKV的prM / E蛋白,并评估母体小鼠的免疫原性和哺乳小鼠的产后保护。 。发现通过体内电穿孔施用三剂50μgpVAX1-ZME诱导强烈的ZIKV特异性细胞和长期体液免疫应答,在成年小鼠中具有高和持续的中和活性。此外,使用母体免疫方案,中和抗体在新生小鼠中提供针对ZIKV感染的特异性被动保护,并有效抑制生长延迟。预计该疫苗候选物将在高等动物中进一步评估,并且母体疫苗接种显示出保护育龄妇女及其后代免于产后ZIKV感染的巨大希望。接种疫苗的母亲和受ZIKV攻击的幼犬在可用的完全免疫活性动物模型中提供关于寨卡疫苗评估的关键见解。