《来自伪狂犬病病毒的重组gI蛋白片段的免疫原性表征及其在猪中的诊断用途评估》

  • 来源专题:农业生物安全
  • 编译者: 任洁
  • 发布时间:2023-11-29
  • 血清学检测是诊断伪狂犬病毒(PRV)感染的重要方法。我们的目的是研究PRV的包膜糖蛋白I (gI),一种强免疫原,以及它作为一种高效、低成本诊断试剂的潜力。本研究以PRV SC株的DNA为模板,利用合成的引物通过PCR扩增出重组gI片段(633 bp),并连接到pET-30a表达载体上。将构建物转移到大肠杆菌中进行原核表达,用猪抗PRV阳性血清进行Western blot分析,鉴定表达产物的抗原性。重组蛋白经Ni柱纯化,用纯化的gI蛋白免疫BALBc小鼠,获得抗gI阳性血清。PRV感染PK-15细胞48 h后,用抗gI小鼠血清荧光免疫法鉴定纯化的gI蛋白的免疫原性。表达重组质粒pET-30a-gI,经尿素变性、透析复生性获得天然gI蛋白。设计了含1.0 gmL纯化gI蛋白的小规模ELISA检测方法,对80份猪血清进行检测,并采用IDEXX试剂盒将ELISA检测结果与竞争性ELISA (cELISA)检测结果进行比较,一致性为97.5%。结果表明,截断的gI蛋白可能是一种潜在的诊断试剂。
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  • 《用于全球蛋白质功能及免疫原性研究的结核分枝杆菌全蛋白质组芯片研制》

    • 来源专题:结核病防治
    • 编译者:李阳
    • 发布时间:2015-03-20
    • 就在几年前,人们普遍认为结核病这一古老而又新发的传染病即将成为继天花之后第二种被彻底消灭的疾病。然而,数年过去了,结核病却重新成为了我们的心腹大患,持续性地危害着人类的健康,原因主要有三点:一是疫苗使用近百年,保护率和保护期受到质疑;二是现有主要药物使用历史已约半世纪,耐药性日趋严重;三是诊断缺乏标识物,检出率低。因此,如何能够迅速检测诊断结核病病原体已经成为摆在科研工作者面前的一个重大问题。 基于此,来自中国科学院生物物理所、上海交通大学、中国科学院武汉病毒所、广东省结核病控制中心、中国科学院武汉水生生物所、上海市疾病预防控制中心和广东体必康生物科技有限公司等机构的学者和临床专家们合作构建了首张结核分枝杆菌全蛋白质组芯片,其相关成果于2014年12月11日在线发表于Cell Reports杂志上。 该项研究构建的蛋白质组芯含有4262个结核分枝杆菌基因组阅读框架编码产物,覆盖其基因组编码蛋白质的95%,可用于全局性蛋白-蛋白相互作用分析,以研究人免疫细胞-结核杆菌的互作机制;小分子与蛋白相互作用分析,以进行药物靶标的全局性发现;高通量血清分析,以系统性地进行结核病诊断生物标识物的发现。 此外,文章基于该芯片分析了蛋白激酶PknG及小分子C-di-GMP的相互作用蛋白,发现结核杆菌的鼠李糖通路可能会受到以上两个分子的同步调控,并且还利用芯片发现了14个可以区分结核病人和治愈者的标识蛋白。   结核分枝杆菌蛋白质组芯片为结核病研究打开了新的窗口,可以系统性发现新的免疫原和标识物,从而发展新型高效疫苗、新药和新的检测技术,是结核病基础研究强有力的新方法学平台。   该项研究历时五年完成,得到了国家“十二五”传染病重大专项、中国科学院重点项目、国家863项目以及国家自然科学基金项目等的支持。
  • 《使用TB16.3-echA1融合蛋白能够改善结核病血清学诊断的灵敏性》

    • 来源专题:结核病防治
    • 编译者:李阳
    • 发布时间:2014-12-23
    •        该研究旨在开发及评估一种结核病诊断方法,具体为使用一些灵敏性增强的融合蛋白来检测血浆中的抗体,由来自巴基斯坦旁遮普大学和加州大学的研究人员共同完成,其相关成果于2014年7月24日在Tuberculosis上发表。        研究首先采用PCR技术从结核杆菌样本中扩增出分别编码与TB16.3和echA1蛋白相对应的TB16.3和echA1基因区域的DNA片段;然后通过一系列的限制和捆绑措施,在大肠杆菌中构建两种新型融合蛋白——TB16.3-echA1和TB16.3-tnPstS1,并使其得到表达;接下来对其进行筛选用于检测人血浆中的抗体。结果显示,个体抗原TB16.3、echA1、tnPstS1以及融合蛋白TB16.3-tnPstS1、TB16.3-echA1的灵敏性分别为29%、25.5%、42.8%、40.0%和47.2%。其中TB16.3-tnPstS1的灵敏性较低可能与两种蛋白的结构安排掩盖了部分表位有关,而TB16.3-echA1的灵敏性较高可能是由于两种蛋白之间的相互作用较弱,从而使其表位能够自由地对抗体进行束缚。 实证研究显示使用融合蛋白TB16.3-tnPstS1或TB16.3-echA1对结核病患者进行检测的阳性率为64%。       综上所述,新型融合蛋白TB16.3-echA1具有潜在的改善结核病血清学诊断灵敏性和可靠性的能力。