• 快讯 木薯叶肉原生质的高效分离和PEG介导的基因瞬时表达

    来源专题:转基因生物新品种培育
    编译者:Zhao
    发布时间:2017-03-20
    木薯为世界三大薯类作物之一,是热带及亚热带地区重要的粮食及能源作物。木薯全基因组测序于2009年已经完成,但由于稳定的遗传转化操作难度较大且所费时间较长。原生质体瞬时表达体系则因其便捷、高效等特点已经被广泛地应用于许多植物基因与蛋白功能鉴定研究中。成熟的木薯原生质体瞬时表达体系的建立,将成为在功能基因组学时代研究木薯基因表达调控、蛋白质亚细胞定位、蛋白互作、启动子活性分析、信号转导机制等方面的理想工具。本研究中,研究人员以木薯组培苗叶片为材料,通过酶解法制备木薯原生质体,利用PEG-Ca2+ 介导转化原生质体,进行目标基因的瞬时表达分析。研究结果表明:在9 %的甘露醇溶液中,25 ℃黑暗环境酶解16 h的条件下,木薯组培苗叶片酶解最适宜的酶液组合为1.6 %纤维素酶和0.8 %离析酶,所获得的原生质体产量为4.42×107个/g FW,活力为92.60 %。当 PEG4000的浓度为25 %、转化时间为10 min时,木薯叶肉原生质体的转化效率最高,可达70.84 %。该研究优化了基因表达的主要影响因素并建立了高效的叶肉原生质体分离和瞬时基因表达体系,对木薯基因的大规模表征及其表征途径起到了积极的促进作用。